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【金秋计划】滋肾清热利湿化瘀方通过KLF4-C/EBPβ通路促进PCOS细胞增殖，抑制PCOS细胞凋亡

城头变幻大王骑

2024/09/04

中药/天然药检测

多囊卵巢综合征(PCOS)患者和动物模型表现出闭锁卵泡增加、颗粒细胞(GCs)紊乱、细胞层变薄和黄体数量减少。一些研究表明，卵泡发育不良与GCs存在相关性。GCs为正常卵泡发育提供必要的激素和营养支持。目前关于PCOS和卵泡发育的大量实验研究都是为了了解GCs的功能。

滋肾清热利湿化瘀方(ZQLHR)由知母、山萸肉、丹参、桃仁、薏苡仁、白芥子、黄柏、玄参、甘草组成，是在中医理论和临床实践的基础上创制的中药方剂，主要用于PCOS。前期研究发现，ZQLHR能有效提高PCOS患者自主排卵率及有排卵月经的发生率，并能改善痤疮及降低血清睾酮水平。然而，ZQLHR治疗PCOS的潜在机制尚未清楚阐明。

验证ZQLHR是否通过Krüppel样因子4(KLF4)-CCATT增强子结合蛋白β (C/EBPβ)通路调控GCs增殖和凋亡，为ZQLHR促进卵泡发育和治疗PCOS患者的作用提供体外分子机制支持。

在前期实验的基础上，首先用不同浓度的ZQLHR处理KGN细胞(一种类固醇性人颗粒样肿瘤细胞系)48 h，观察各组细胞的凋亡情况。其次，采用实时荧光定量PCR(q-PCR)和Western blot检测ZQLHR给药后KGN细胞中KLF4和C/EBPβ mRNA和蛋白的表达水平。第三，利用siRNA敲除KLF4和C/EBPβ后，检测KGN细胞中KLF4和C/EBPβ的关系。

进一步通过细胞计数试剂盒-8、集落形成实验和流式细胞术验证ZQLHR是否通过KLF4-C/EBPβ通路促进KGN细胞增殖和凋亡。最后，采用q-PCR和Western blot检测ZQLHR是否通过KLF4-C/EBPβ通路介导b细胞淋巴瘤-2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X (BAX)、增殖细胞核抗原(PCNA)和裂解caspase-3等增殖和凋亡相关因子影响KGN细胞的增殖和凋亡。

体积0.2%的ZQLHR对KGN细胞的凋亡率最低。ZQLHR处理后，KGN细胞中KLF4和C/EBPβ的表达水平升高。此外，ZQLHR通过KLF4-C/EBPβ通路调节增殖和凋亡相关因子，促进KGN细胞增殖和抑制凋亡。此外，证实了KLF4和C/EBPβ在KGN细胞中相互调节。这些结果表明，ZQLHR可增强GCs的增殖并抑制其凋亡，这可能是治疗PCOS患者的一种治疗机制。

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