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C18的用法大全
p3203140
2024/09/04
私聊
液相色谱(LC)
1、C18的特殊用法
可用来除盐:一般的盐在C18上没有保留,而目标物有保留。
可以用来净化血样或组织样中的脂肪等非极性组分。
大极性样品难保留时,可选用亲水C18,并用纯水相洗脱,以延长驻留时间,甚至可以双柱串联。
小极性样品难洗脱时,用乙腈搭配乙醇洗脱,或乙腈搭配二氯甲烷等洗脱。
可用来富集或浓缩样品:对于水比例较高的稀溶液,可以将目标物富集吸附到C18上,然后再用高比例的有机相洗脱,达到浓缩的目的。 2、 C18使用注意事项 常规C18的使用,不能用纯水相洗脱,流动相中至少含有3%有机相,否则会发生C18键合相疏水塌陷,造成色谱柱没有保留能力。疏水塌陷后可用有机相再将疏水C18链展开。下面(a)图显示长链是舒展开的;(b)图显示为长链疏水塌陷。
图片参考文献【1】
在pH限定范围内使用,常规C18的pH耐受2-6,特殊键合的C18(杂化修饰)可耐受pH1-12,但还是不建议长时间保存在极端pH环境中。
柱温一般不超过50℃,最高不超过60℃。
水相使用超纯水或蒸馏水,有机相试剂使用色谱纯以上级别。
缓冲盐流动相需过0.45
μm
滤膜后使用。
用缓冲盐,有机相比例不能超过75%(具体看盐浓度和盐的溶解性),完成实验后用高比例水相置换掉缓冲盐,再换高比例有机相冲洗色谱柱。
为了延长C18柱的寿命,最好专柱专用,尤其是酸碱性条件不能频繁切换。
方法开发时,尽量使用新色谱柱。
C18色谱柱冲洗:
①没有用缓冲盐,直接用甲醇或乙腈冲洗10个柱体积后保存;②用了缓冲盐,先用95%水甲醇冲洗10个柱体积,再用甲醇冲洗10个柱体积后保存;
③冲洗小极性杂质:完成上述①或者②后再用二氯甲烷冲洗10个柱体积,然后置换成甲醇或乙腈。(注:二氯甲烷与水不互溶,一定要用甲醇或乙腈过渡。)
参考文献:[1] Przybyciel, M. & Majors, Ronald. (2002). Phase Collapse in Reversed-Phase LC. LC-GC Eur. 15. 15. 1-5.
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