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HPLC色谱柱污染后的再生方法

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2024/10/17

液相色谱（LC）

众所周知，色谱柱用久了容易柱效、峰型变差，那么色谱柱被污染了，需要怎样冲洗或者再生呢？

清洗色谱柱时，一般每种溶剂使用20倍以上柱体积去冲洗色谱柱，首先需确保色谱柱内没有缓冲液，且清洗前色谱柱中的残留溶剂应与后一种清洗溶剂互溶。

下面是不同种类填料色谱柱的常规冲洗方法。

对于各类污染的对应冲洗方案：

1、反相中盐析：95%水乙腈小流速冲洗，直至柱压下降。

2、反相中非极性化合物的强吸附：柱内无盐情况下，乙醇冲洗后二氯甲烷冲洗，基本能洗掉非极性化合物。

3、反相中残留蛋白：①95%水乙腈过渡后，用0.1%TFA水梯度洗脱至0.1%TFA（乙腈/异丙醇1：2）；如果是耐碱的色谱柱，可以在①的基础上再用95%水乙腈过渡后，用5M尿素或5M硫氰酸胍（pH7）清洗。

4、反相中金属离子残留：0.05M EDTA。

5、反相中离子对试剂污染：95%水乙腈过渡，再用95%乙腈水冲洗。但离子对试剂污染后很难完全冲洗干净。

6、离子交换或SEC中蛋白残留：5M尿素或5M硫氰酸胍（pH7）

Tips:①冲洗前后的置换溶剂要互溶；②冲洗色谱柱不连接检测器。

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