方法优化

菊花菊花是中国十大名花之三，花中四君子（梅兰竹菊）之一，也是世界四大切花（菊花、月季、康乃馨、唐菖蒲）之一，产量居首。因菊花具有清寒傲雪的品格，才有陶渊明的“采菊东篱下，悠然见南山”的名句。中国人有重阳节赏菊和饮菊花酒的习俗。唐孟浩然《过故人庄》：“待到重阳日，还来就菊花。”在古神话传说中菊花还被赋予了吉祥、长寿的含义。菊花具有疏肝和中，化痰散结之功效。用于肝胃气痛，郁闷心烦，梅核气，瘰疠疮毒。文中参照中国药典2020年版一部，采用月旭Ultimate® XB-C18色谱柱，在对梯度进行药典范围内微调后，能满足检测需求。01 色谱条件 2、供试品溶液2.1 原标准条件第yi针样品图，红线框内主成分相领没有干扰峰。2.2 原标准条件第二针起的样品图，红框内主成分峰处，上一针保留过强没洗脱下来的强保留物质出现在了下一针的色谱柱中，干扰了主成分的检测。2.3 药典中对梯度洗脱方法的比例调整上写明：可适当调整流动相组分比例，以保证系统适用性符合要求，并且最终流动相强度不得弱于原梯度的洗脱强度。本项目中，三个主成分峰均在30分钟之前出峰，而对第二针产生的干扰峰是因梯度后段洗脱能力不够而干扰到了下一针，我们对主成分出峰后的30-40分钟的流动相比例进行调整，增加有机相的比例，以保证强保留杂质都被清洗出来，以避免干扰下一针。2.4 方法优化后，连续进样5针，样品图均能达到完全重现，不再出现干扰峰（附图为第三针样品图的效果）。03 结论 用月旭Ultimate® XB-C18（4.6×250mm，5μm），在此优化后色谱条件下测定，能满足检测的要求。04 订货信息

新药研发过程中的分析方法开发是一个耗时费力的过程。原因是在这个过程中，我们需要耗费大量的重复劳动和人力，用于确定和优化正确的分析条件和技术参数。为了解决这些问题，研究人员需要使用多种不同的技术和平台。珀金埃尔默建立一个一站式、全自动化配置优化的平台——JANUS® G3分析方法开发工作站平台，该系统基于均相时间分辨荧光技术（HTRF® ）的蛋白质间相互作用（PPI）的检测和分析，且提供了⼀种便捷⾼效、⾼阳性率的单克隆抗体阳性克隆筛选方法，助力新药研发过程的高效优化。平台配置如下图1。图1：JANUS® G3分析方法开发工作站平台1扩展台面，支持复杂实验流程的微孔板制备2微孔板振荡功能，保证孔板里液体的高效混合3VICTOR® Nivo™ 微孔板检测仪，可读取分析数据4整合型机械抓手，可实现微孔板和其他实验耗材的抓取，并在工作站台面及VICTOR® Nivo™ 微孔板检测仪间自动转移5VariSpan™ 移液机械臂，可通过独立的通道液面检测精准地制备出微孔板什么是HTRF?均相时间分辨荧光（HTRF, Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）是⽤来检测纯液相体系中待测物的⼀种常⽤⽅法。它提供了一种简单、免洗的方法，可在短短两个小时内检出靶蛋白并对其进行量化分析。它将荧光共振能量转移（FRET）和时间分辨测量的优点相结合，可消除短暂的背景荧光，成为分析方法学开发应用中的理想选择。在FRET实验中，生物分子（如蛋白等）被荧光基团供受体标记。当生物分子之间相互作用，供受体荧光基团的距离被拉近。此时，若供体被激发，它会传递它的发射光能量给受体。受体和供体的发射光具有不同的波长，可以被微孔板读板机区分，从而定量生物分子之间的相互作用。使用镧系元素荧光基团作为供体，发射光有很长的半衰期，HTRF可以利用时间分辨检测荧光，消除短半衰期背景荧光的干扰。在HTRF实验中，由于供体荧光基团发射光有较长半衰期，供受体荧光基团的激发和发射都可以在短半衰期背景荧光消失后再检测。典型的HTRF检测把铕穴状化合物用作供体，有机荧光团d2用作受体(技术原理如下图2)。图2：均相时间分辨荧光 (HTRF)原理图HTRF的优势?与传统检测技术相比, HTRF检测的主要优点：1灵敏度高，实验通量高2步骤简单，无需包被和洗板，无需避光，适用于贴壁细胞和悬浮细胞，只需将细胞进行刺激→裂解→加检测试剂→读板；（无需洗板机，不需要加热和避光孵育塔，成本降低，自动化程度高，Perkin Elmer提供一站式解决方案）3降低背景和提高信噪比，提高灵敏度，数据真实可靠4支持96或384孔板至更高通量分析检测5实验体系稳定，可耐受较宽的pH范围、二价金属离子、螯合物等，并可在48小时内反复多次检测HTRF的应用？检测可分析生物化学过程中的分子相互作用，被广泛用于研究激酶、细胞信号转导通路、蛋白相互作用PPI（protein-protein interaction）、DNA与蛋白的相互作用、细胞毒性以及受体与配体的结合。其中供体和受体可以被用于标记各种生物分子，应用范围包括表观遗传学，生物标志物定量，GPCR信号转导等。特别，该检测技术支持强大的混合-读数模式，无需进行任何清洗步骤。这一优点连同实验的稳定性，使该技术非常适用于自动化和筛选类应用。珀金埃尔默JANUS® G3分析方法开发工作站平台助力新药研发该平台基于均相时间分辨荧光技术(HTRF)。采用了TIBCO

难题：饮用水中的硝酸盐美国环保局（EPA）乃至公众担心饮用水中的营养物质（例如含氮和磷的物质）含量过高，会危及公共健康，这就使得水处理厂必须改进处理工艺。对致力于满足法规规定的氮含量限值的水处理厂来说，如何降低来自径流、肥料、污水、发电厂、化学品厂的含氮化合物的浓度始终是个难题。当饮用水中的含氮量过高时，配水系统就会被富营养化，成为细菌的滋生地。硝酸盐危害婴儿、孕妇、酶缺乏症患者的健康，降低他们的血液送氧能力1,2。美国环保局规定的饮用水中的硝酸盐浓度限值为10 ppm，亚硝酸盐浓度限值为1 ppm2。工农业生产的废物和人类的排泄物排放到环境中，地表水和地下水中的硝酸盐含量越来越高，例如在美国加州的地下水井中就检测到高浓度的硝酸盐。因此，脱硝（脱氮）就成为水处理工艺的一个重要环节。方法：生物脱硝脱硝是通过添加碳源（也称为电子供体，例如源流中的甲醇、乙醇、MicroC® 、乙酸、糖浆、碳等），将硝酸盐还原成氮气的过程3。生物脱硝是其中一种脱硝方法，就是用厌氧细菌来消化碳源，从而降低硝酸盐含量3。与常规过滤和泥浆脱硝相比，生物脱硝有诸多优点，例如生物脱硝可以在连续过程中进行，且无需去除固体颗粒。生物脱硝对能源的需求极低，占用的工作面积小，还可以通过提高碳源的利用率来不断优化脱硝工艺。当细菌消耗掉硝酸盐之后，氮气便从水处理池中排出，就可以对脱硝后的水进行最终处理，然后将其送到配水系统中。这种生物处理方法也可以用来去除其它污染物，如铬酸盐、高氯酸盐、硒等。解决方案：TOC分析法的优势生物脱硝的关键在于优化碳源的用量。世界卫生组织在关于去除硝酸盐的文献中说，“控制碳源用量对工艺操作至关重要，可以使用在线型分析仪来监测处理后的水中的残留物浓度”4。在进行脱硝时，如果用碳量不够，就无法将硝酸盐全部还原成氮气，还会在水中留下大量的亚硝酸盐和氮氧化物。相反，如果用碳量过高，细菌就会进而分解水中其它化学物质，例如分解硫酸盐，产生硫化氢气体，不但气味难闻，还会造成有害后果。如果出水中有大量的细菌或碳，就会提高生物需氧量（BOD，Biological Oxygen Demand），增加有机消毒副产物（DBP，Disinfection Byproduct）的前体。最理想的情况是用碳量刚好能维持细菌的活性。因此，碳源使用的优化对于实现高效脱硝、节约成本、提高工艺效率来说至关重要。TOC分析仪在监测进水中的硝酸盐和出水中的硝酸盐/亚硝酸盐的含量时，能够给出给定碳源的除氮量。用TOC分析仪进行脱硝后的监测，能够以非专属的方法来快速测量碳源的除氮效率。生物脱硝的工艺流程如图1所示。TOC在线分析法能够实时显示用碳量和除氮量之间的关系变化和偏差。此分析法不仅可以保证水中的硝酸盐和有机物含量降到最低，还能节省操作设备所需的时间、资源、化学品、资金。连续监测法允许操作人员根据情况变化来及时调整工艺，而无需将样品送到第三方实验室进行分析，因而具有省时省力的优点。图1：生物脱硝流程示意图采用TOC在线分析法后，就不必再根据出水中的硝酸盐/亚硝酸盐的浓度来猜测碳源的使用效率。用此方法来监测脱硝结果还有一大优点，就是能够同下游水处理厂的工艺相匹配。对饮用水进行TOC分析，有助于水厂达到美国环保局对TOC去除率、DBP监测、工艺优化的规定指标。随着社会对经济饮用水的需求不断提高、水资源相对减少、人们的污染防范意识越来越强，水处理厂有必要优化工艺，以便高效去除水中的营养物质和有机污染物。参考文献“Rolling Revision of the WHO Guidelines for Drinking-Water Quality: Nitrates and nitrites in drinking-water.” July 2004. World Health Organization.“Consumer Factsheet on: NITRATES/NITRITES.” US EPA. http://www.epa.gov/ogwdw/pdfs/factsheets/ioc/nitrates.pdfNeethling, J.B. “Tertiary Denitrification Processes for Low Nitrogen and Phosphorus.” November 2010. Water Environment Research Foundation. “Water Treatment Processes for Reducing Nitrate Concentrations.” World Health Organization: Water Sanitation Health. http://www.who.int/water_sanitation_health/dwq/chemicals/en/nitrateschap6.pdf◆ ◆ ◆联系我们，了解更多！