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【转帖】高效液相色谱法注意事项

mine555

2009/04/25

液相色谱（LC）

1.即使泵能耐压6000PSI的压力，但不要使泵处于4000PSI以上的压力为宜。
2.安装及拆卸色谱柱时应注意柱的连接方向，千万不能接反。否则可能导致柱效降低，甚至损坏色谱柱。
3.严禁开空泵。在无流动相通过时不要扳动进样阀的操作杆，使用时要注意尽可能少扳动，以免磨损内部的密封垫圈。
4.为了延长检测器灯源的使用寿命，在色谱泵稳定后再打开检测器电源开关，分析结束后立即关闭检测器。
5.应使用高纯度、高质量的溶剂和试剂。
6.避免pH值超限，pH值应控制在2.2～7.5之间。pH值偏低或偏高都会腐蚀液相系统的不锈钢材料；破坏色谱柱填料的结构，使填料失活。
7.色谱柱温不能超过规定要求，柱温过高会加速色谱柱填料老化，破坏其结构。
8.使用所有溶剂必须是互溶的。这对于缓冲流动相来说是非常重要的，盐类的析出会很快损坏要维护的部件。
9.流动相首选甲醇-水系统，如经试用不适合时，再选用其他溶剂。为保护仪器，应尽可能少用含有缓冲液的流动相。如果流动相中含有缓冲剂，每日使用后应用不含缓冲剂的流动相或新鲜纯化水将仪器管路、泵、进样阀、色谱柱及检测池等充分冲洗干净。
10.如果液相系统使用未过滤的洗脱液、注入未过滤的样品、系统中滞留缓冲洗脱液都能堵塞系统或划伤泵柱塞。所以流动相、样品使用前必须用0.45μm微孔滤膜过滤；流动相并先经脱气处理后使用。停泵后决不允许缓冲洗脱液滞留在系统中，须用经过滤后的新鲜纯化水进行清洗，并保证将缓冲剂冲洗干净。
11.如果泵闭置在2天以上，应将甲醇注满液相系统，以避免水溶剂系统中可能存在微生物的繁殖。
12.色谱柱保存时应使填充剂处在润湿状态，两端密塞。反相柱（如十八烷基硅烷键合硅胶柱）可在甲醇中保存；正相柱（如硅胶柱）可在正己烷中保存等。
13.决不能使用盐酸溶液。一般来说，任何浓度的卤化物都会腐蚀未经钝化的不锈钢材料。
14.尽量避免使用在电化学过程中引起腐蚀的金属离子。应避免的典型金属离子有锰、铬、锌、铜、镍、钼、铁。

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