【求助】关于流动相缓冲液PH的选择

1 .确定最佳分离状态时的流动相pH
2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）
3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液）

非常感谢您的帮忙，
1、就是难以确定最佳分离状态时的流动相ph，0.1mol/L的HAC是参照参考文献的
2、意思是选择与目标物PKa相近的PH缓冲液？
3、检测波长为280纳米，醋酸缓冲液在此波长下，不干扰检测

如果是方法开发你可以找和你品种相近的做参考，你的那个参考就可以
初步确定流动相的PH然后选择与PH相近的PKa的缓冲液做流动相

初步确定流动相的PH然后选择与PH相近的PKa的缓冲液做流动相

这段话不是很理解，尤其是后面一半

如果PH定为4.5 选PKa为4.5的缓冲液

非常感谢，本方法暂采用文献中的流动相0.1mol/L的醋酸，ph=2.86，结果是保留时间比较短。在本论坛中看到过在选择缓冲液PH值之前，应先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka两个PH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，从HH公式：PH＝Pka＋log（[A-]/[A]）得知，溶液PH值高于或低于Pka两个单位，化合物中99％以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。。因此，请教高手，依次说法，本目标物是否应该以低于pka（2.36）2个单位的PH值作为流动相缓冲液的ph比较合适？

高于低于不好定，还是多尝试找到比较合适的PH才能确定缓冲液。

自己可以摸索不同的PH对结果的影响。

上次看到适合ph在PKa+ -2比较好。

你的样品极性太大了
使用反相系统，怎么调，保留时间都不会变化多少
建议使用正相色谱试试