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【求助】质量标准检测发现问题，怎么办才好？

  • bluewonjdeer
    2011/05/09
    • 私聊

液相色谱（LC）

  • 　求助：中药口服液质量标准制定的一些问题

    　　第一次做新药，是一个中药复方口服液，主要成分中含有氢溴酸东蒗菪碱，质量标准制定如下：

    　　5.1.1色谱条件

    　　色谱柱：Promosil C18(250×4.6mm，5µm，博纳艾杰尔公司);流动相：0.07mol/L磷酸钠溶液 (用磷酸调 pH值至6.0，含0.0175mol/L十二烷基硫酸钠)-乙腈 (2：1);流速：0.8ml/min;检测波长：216nm;柱温：25℃;进样量：10ul。理论塔板数按氢溴酸东莨菪碱峰计算应不低于10000。

    　　5.1.2 供试品和对照品溶液的制备

    　　5.1.2.1 对照品溶液 精密称取氢溴酸东莨菪碱10.18mg，置10ml容量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)使溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含1.018mg的溶液(东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445)。

    　　5.1.2.2 供试品溶液 精密量取本品溶液5ml，置锥形瓶中，加入2mol/L盐酸溶液30ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，滤过，滤渣和滤器用 2mol/L盐酸溶液分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH值至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收容剂至干，残渣用0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。

    　　5.1.3 阴性对照品溶液的制备 按处方比例及工艺，制备缺洋金花的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含洋金花的阴性样品溶液。

    　　5.1.4 测定方法

    　　精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10u1，分别注入液相色谱仪(自动进样仪)，测定峰面积，以外标法计算含量。

    　　5.1.5 系统适用性试验

    　　分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性品溶液10ul注入高效液相色谱仪，阴性对照品在氢溴酸东莨菪碱峰位置处无吸收峰，即其它成分对测定无干扰，氢溴酸东莨菪碱峰与其它组分峰基线分离良好。

    　　5.1.6 线性试验

    　　精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品10.16mg，置25ml量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置10ml量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)溶解并稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定，分别进样10ul，测得峰面积积分值。以对照品的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=1.3×107C-9243.77，相关系数r：=0.9997。表明进样量在0.2032～1.2192ug范围内呈良好线性关系。

    　　5.1.7 稳定性试验

    　　精密量取供试品溶液5ml，按供试品(批号：2009010501)溶液制备方法制成供试品溶液，间隔一定时间(0，4，8，12，24，48h)重复进样，每次进样10ul，测得峰面积的RSD为1.78%，表明该溶液在48小时基本稳定。

    　　5.1.8 精密度试验

    　　精密吸取上述对照品溶液10ul，重复进样6次，测定东莨菪碱的峰面积，结果 RSD%为0.58%(n=6)。表明本方法精密度良好。

    　　5.1.9 重复性试验

    　　精密量取供试品溶液(批号：2009010501)5ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，分别测定东莨菪碱的含量，结果RSD为1.42%(n=6)。表明本方法有较好的重复性 。

    　　5.1.10 加样回收率试验

    　　5.1.10.1 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品约7.8mg，置100ml的容量瓶内，加0.07mol/L磷酸钠溶液(用磷酸调pH至6.0)使溶解，并稀释至刻度，即得。

    　　5.1.10.2 采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml/2ml/3ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定，结果平均回收率为106.7%，RSD为1.42%。

    　　回收率=(测的东莨菪碱含量—样品中东莨菪碱含量)/加入东莨菪碱量

    　　因为是第一次作含量测定，有许多不明白之处，中药质量标制定准指导原则也说得不清不楚，许多都是按照自己理解摸索来的。

    　　通过测定样品的平均含量为0.077mg/ml。线性试验是根据样品的平均含量，以样品的平均含量为中间值，制定的线性取样范围。


    　　根据加样回收中对照品加入量与样品含量之和在线性范围的原则，按照80%，100%，120%的原则加入对照品，但是结果很不理想，加样回收率超过了200%，不知道是什么方面的原因，很着急，请大家帮忙分析一下，找出有错误的地方，我马上更改。
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  • gzgaoling

    第1楼2011/05/10

    楼主做新药标准的，关注下。

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  • xhwy2010

    第2楼2011/05/10

    楼主的加样回收率结果到底是什么，为什么前面有
    “采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml/2ml/3ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定，结果平均回收率为106.7%，RSD为1.42%。”？
    与后面“根据加样回收中对照品加入量与样品含量之和在线性范围的原则，按照80%，100%，120%的原则加入对照品，但是结果很不理想，加样回收率超过了200%”矛盾呀！

0
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  • zhaohua8011

    第3楼2011/05/10

    看看你的计算是否有错误？加标后浓度体积变化！

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  • bluewonjdeer

    第4楼2011/05/10

    不好意思 ，没有说明白 ，我用的是岛津的液相机子，用面积外标法计算，测定样品含量时的公式 为 ： 样品峰面积*10.18mg*98%/对照品峰面积*5ml*10倍*1.445
    对照品峰面积为12404344.5，样品峰面积为6983970.5，6922532，6949904.5，6957659.5，
    6965083.5

    加样回收中对照品溶液2ml/2.5ml/3ml与80%，100%，120%表述的是一个意思，家养回收率计算公式为 ：杨品峰面积*7.8mg*样品稀释倍数*98%/对照品峰面积*样品取样量*100倍 *1.445

    加样对照峰面积为1425672.938，对照品加入量为2.5ml时的峰面积为
    3433927.75
    3418554.25
    3503073.25
    3477568.5
    3489245.25
    3473198.5
    另外，我如何确定对照品取样量，才能保证样品含量测定的准确度。

    xhwy2010(xhwy2010) 发表:楼主的加样回收率结果到底是什么，为什么前面有
    “采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml/2ml/3ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定，结果平均回收率为106.7%，RSD为1.42%。”？
    与后面“根据加样回收中对照品加入量与样品含量之和在线性范围的原则，按照80%，100%，120%的原则加入对照品，但是结果很不理想，加样回收率超过了200%”矛盾呀！

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  • xhwy2010

    第5楼2011/05/10

    还是没看明白。不过我发现你的操作中存在一个问题：对照品峰面积为12404344.5，样品峰面积为6983970.5 差别有些大，对照品峰面积最好与样品峰面积差不多（个人认为要达到90%~110%），因为从你的描述来看，你用的是单点校正而不是标准曲线法，只有线性曲线过原点时对某个浓度的计算二者差别才不大。另外你如果加标回收，加标样测定出来的面积也要与对照面积大小相似，才能保证测定结果的准确，当然所有进样浓度都应该在确定的线性范围内。

    再有你的200%具体计算过程贴出来，让大家看一看，我怀疑你的计算有误。

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  • bluewonjdeer

    第6楼2011/05/11

    供试品和对照品溶液的制备
    1. 对照品溶液 精密称取氢溴酸东莨菪碱10.18mg，置10ml容量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含1.018mg的溶液（东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445）。
    2. 供试品溶液 精密量取本品溶液5ml，置锥形瓶中，加入2mol/L盐酸溶液30ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，滤过，滤渣和滤器用 2mol/L盐酸溶液分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH值至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收容剂至干，残渣用0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。
    我用的是面积外标法计算：
    我的计算公式为：样品峰面积×10.18mg×98%×1倍稀释÷对照品峰面积÷5ml÷10倍稀释÷1.445
    对照品峰面积分别为12405085,2403604
    样品峰面积分别为
    6983970.5
    6922532
    6949904.5
    6957659.5
    6965083.5
    我计算的含量分别为
    0.078mg/ml
    0.077 mg/ml
    0.077 mg/ml
    0.077 mg/ml
    0.077 mg/ml
    加样回收率试验
    1. 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品约7.8mg，置100ml的容量瓶内，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，即得。
    2. 采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定。
    回收率=（测的东莨菪碱含量—样品中东莨菪碱含量）/加入东莨菪碱量
    我的计算公式为：样品峰面积×7.8mg×98%×2倍稀释÷对照品峰面积÷2.5ml÷100倍稀释÷1.445
    加样对照峰面积分别为
    1435563.25
    1415782.625
    加样回收样品峰面积分别为
    3433927.75
    3418554.25
    3503073.25
    3477568.5
    3489245.25
    3473198.5计算结果
    原有量（mg） 加入量（mg） 测得量（mg） 回收率（%）
    0.1925 0.195 0.51 163
    0.1925 0.195 0.505 160
    0.1925 0.195 0.52 168
    0.1925 0.195 0.515 165
    0.1925 0.195 0.52 168
    0.1925 0.195 0.515 165

    我的试验设置，及方法是否正确？

    xhwy2010(xhwy2010) 发表:还是没看明白。不过我发现你的操作中存在一个问题：对照品峰面积为12404344.5，样品峰面积为6983970.5 差别有些大，对照品峰面积最好与样品峰面积差不多（个人认为要达到90%~110%），因为从你的描述来看，你用的是单点校正而不是标准曲线法，只有线性曲线过原点时对某个浓度的计算二者差别才不大。另外你如果加标回收，加标样测定出来的面积也要与对照面积大小相似，才能保证测定结果的准确，当然所有进样浓度都应该在确定的线性范围内。

    再有你的200%具体计算过程贴出来，让大家看一看，我怀疑你的计算有误。

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  • xhwy2010

    第7楼2011/05/12

    "对照品峰面积分别为12405085,2403604",为什么有两个数据，而且相差那么大？
    计算样品含量时，"精密量取本品溶液5ml......溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得" 5ml本品溶液------5ml供试品溶液，相当于供试品溶液没有稀释，你的计算中为何还有一个5ml？
    你的样品测定过程中还有一个最大的问题就是我原来提到的用单点校正法对照和供试品峰面积一致才有可计算性。你可以自己算一算，一般来讲，色谱条件相同的条件下，不是同一天进样，同一个溶液的峰面积不会相差很大。而前后两个对照浓度比：10.18/7.8*10=13.05，峰面积比：12405085/1435563.25=8.64,可见，峰面积与浓度不是简单的正比关系。所以对照和供试峰面积差得较多时，计算结果根本不对。我见你做过线性，也就是标准曲线，这种情况应该用你的标准曲线计算。原有量，加入量数值好像都不对，原有量应该乘以5（而且需要用标准曲线计算），加入量你没有除以1.445.
    因为我也不太清楚你的实验，说的不对的地方还请见谅。

    bluewonjdeer(bluewonjdeer) 发表:供试品和对照品溶液的制备
    1. 对照品溶液 精密称取氢溴酸东莨菪碱10.18mg，置10ml容量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含1.018mg的溶液（东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445）。
    2. 供试品溶液 精密量取本品溶液5ml，置锥形瓶中，加入2mol/L盐酸溶液30ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，滤过，滤渣和滤器用 2mol/L盐酸溶液分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH值至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收容剂至干，残渣用0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。
    我用的是面积外标法计算：
    我的计算公式为：样品峰面积×10.18mg×98%×1倍稀释÷对照品峰面积÷5ml÷10倍稀释÷1.445
    对照品峰面积分别为12405085,2403604
    样品峰面积分别为
    6983970.5
    6922532
    6949904.5
    6957659.5
    6965083.5
    我计算的含量分别为
    0.078mg/ml
    0.077 mg/ml
    0.077 mg/ml
    0.077 mg/ml
    0.077 mg/ml
    加样回收率试验
    1. 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品约7.8mg，置100ml的容量瓶内，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，即得。
    2. 采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定。
    回收率=（测的东莨菪碱含量—样品中东莨菪碱含量）/加入东莨菪碱量
    我的计算公式为：样品峰面积×7.8mg×98%×2倍稀释÷对照品峰面积÷2.5ml÷100倍稀释÷1.445
    加样对照峰面积分别为
    1435563.25
    1415782.625
    加样回收样品峰面积分别为
    3433927.75
    3418554.25
    3503073.25
    3477568.5
    3489245.25
    3473198.5计算结果
    原有量（mg） 加入量（mg） 测得量（mg） 回收率（%）
    0.1925 0.195 0.51 163
    0.1925 0.195 0.505 160
    0.1925 0.195 0.52 168
    0.1925 0.195 0.515 165
    0.1925 0.195 0.52 168
    0.1925 0.195 0.515 165

    我的试验设置，及方法是否正确？

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