M1检测技术支持

ldy2159

2012/02/27

私聊

食品毒素/微生物检测

高效液相色谱法：

根据国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定

　实验用前处理：

实验仪器和好耗材包括：

恒温水浴锅　溶剂过滤器(带真空泵)1000ml 高速匀质器黄曲霉毒素免疫M1亲和柱玻璃纤维滤纸玻璃注射器无荧光特性玻璃试管空气压力泵超声波清洗机定量滤纸量筒样品瓶容量瓶移液器或移液管

　　实验用试剂：色谱乙腈色谱甲醇氢氧化钠石油醚超纯水或去离子水等等

HPLC条件：

高效液相色谱仪
色谱柱 C18柱，150*4.6mm，5um
流动相乙腈－水（25：75）
荧光检测器：激发波长365nm，发射波长435nm；
柱温室温
流速 1.0ml/min
进样量 20ul
出峰时间 10分钟左右

样品取样：真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以必需保证样品收集和取样具有代表性。

样品前处理

牛奶水浴加热至40度，离心用上清液过柱净化；

免疫柱净化步骤：完全符合GB/T 18980-2003

┅┅取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上。

┅┅将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器；

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体；

┅┅更换玻璃注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。

┅┅准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测。

注：收集管中的洗脱液即为纯化后的样品，可直接用ELISA,荧光和高效液相等方法检测。

HPLC 检测需要仪器与耗材

产品名称说明规格
黄曲霉毒素M1固体标准品参比对照使用 100ug 1mg
黄曲霉毒素M1液体标准品浓度0.5ug/ml, 溶于乙腈 1ml
PriboFast 黄曲霉素M1免疫亲和柱用于样品前处理柱分析黄曲霉素 25/50T
PriboFast泵流操作架（8位）用于免疫亲和柱净化样品处理，方便控制流速
黄曲霉毒素检测专用玻璃纤维滤纸用于去除HPLC检测时部分杂峰，有效提高灵敏度。110，1.5um 100P
不锈钢均质器高速匀浆样品，有效提高萃取效率
旋转蒸发仪-超声波发生器

酶联免疫检测法：符合国家标准

酶联免疫检测法采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，加入样本（或黄曲霉毒素M1标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素M1与预包被在板孔上的黄曲霉毒素M1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素M1抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素M1的含量。

样品处理

牛奶直接离心取上清液用于检测

奶粉及其他固状奶制品：需要溶解于去离子水中，离心取上清液用于检测

试剂盒检测时间：30分钟＋30分钟

交叉反应率：

Aflatoxin M1 100%
Aflatoxin B1 8%
Aflatoxin B2 10%
Aflatoxin G1 7%
Aflatoxin G2 5%

ELISA 方法检测需要：

说明
PriboFast 黄曲霉毒素M1酶联免疫检测试剂盒检测范围 (0.1 ppb －8.1ppb) 96孔
雷勃半支灭菌移液器（彩色）多个量程：0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul 支
雷勃八道半支灭菌移液器量程： 5-50ul; 50-300ul 支
酶标仪进口、国产仪器，台

　　分析人员要求：

化学分析仪器及其相关专业或有高效液相色谱仪操作经验的人员。

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