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ELISA常见问题及解决方案
省部重点实验室
2013/01/08
私聊
生命科学仪器综合讨论
做过一段时间的ELISA,总结了一些经验,供自己日后复习,也放在这里供大家参考。
症状:
1. 阳性与阴性不能达到2.1的比值,阴性颜色太深。
2. 阳性与阴性不能达到2.1的比值,阳性颜色太浅。
3. 增加抗原浓度,一抗浓度不变,显色反应没有表现出应有的梯度。
4. 增加一抗浓度,显色反应没有表现出应有的梯度。
5. 加完TMB显色后颜色梯度很明显,但加了硫酸终止反应后颜色梯度没有那么明显了。
可能问题:
1. 阴性对照(也就是阳性对照的除目标抗原外的其它成分)中有某种成分与一抗作用。
2. 1)一抗效价不好。
2)抗原太稀。
3)封闭时间过长。
3. 一抗与抗原的比例已经饱和。
4. 一抗与抗原的比例已经饱和。
5. 硫酸可能把其它成分都炭化了。
解决办法:
1. 纯化抗原除去干扰成分。
2. 1)换用一抗或增加一抗用量。
2)增加抗原浓度。
3)缩短封闭时间,封闭时间一般2小时以内即可。
3. 增加一抗用量; 或在一抗用量不变的情况下减少抗原浓度做梯度。
4. 增加抗原用量;或在抗原用量不变的情况下减少一抗浓度做梯度。
5. 加少一点硫酸,参考值:50 μlTMB+35 μl硫酸。
我认为一抗和封闭都是比较重要的步骤,如果ELISA还做不出满意的结果,可以从这两方面改进实验条件,能比较快地达到目的。
分
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版主-zhang8826857
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