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动物源性食品中β-受体激动剂检测的固相萃取方法

逗点生物

2015/08/14

私聊

食品毒素/微生物检测

动物源性食品中β-受体激动剂检测的固相萃取方法

一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为猪肉样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化猪肉样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

五种β-受体激动剂物质:克仑特罗(CAS:37148-27-9),沙丁胺醇（CAS:18559-94-9），莱克多巴胺（CAS：97825-25-7）,特布他林(CAS:23031-25-6),妥布特罗(CAS:41570-61-0)。

三、应用范围

本方法适用于动物源性食品中β-受体激动剂LC-MS/MS检测及确证。

四、参考标准

推荐性国家标准《GB/T 21313-2007 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》

五、实验材料
MCX固相萃取柱6mL/200mg。
六、实验方法
1、样品提取
称取均质试样10.0ｇ试样（精确至0.01ｇ），加入15mLpH 5.2的乙酸-乙酸铵缓冲溶液，1000 r/min 匀浆1 min，再加入β-噗糖醛酸苷肽酶/芳香磺酸酯酶溶液100 μL，于37℃±1℃振荡酶解过夜。取出冷却后，10℃9500 r/min离心10 min。取全部上清液，待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：加入6mL5%甲醇氨、6mL甲醇、6mL水、6mL 0.1mmol/L高氯酸（pH 4.0）溶液活化。
(2)上样和洗脱：当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，过柱，弃去滤液，用2mL甲醇、2mL 2%甲醇水溶液淋洗，最后用7mL5%甲醇氨洗脱。
(3)重新溶解：洗脱液缓慢氮气流条件下吹至近干，用甲醇-0.1%甲酸水溶液溶解定容至1.0mL，涡旋混匀1min，用于LC-MS/MS测定。
4、LC-MS条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1×150mm，5µm，100Å）；
质谱仪：API 4000
流动相：A:10mM乙酸铵（0.1%甲酸）溶液 B:甲醇溶液；

表1梯度洗脱条件

时间/min	B/%	A/%
0.00	5	95
4.00	50	50
6.00	10	90
8.00	95	5
8.01	5	95
12.00	Stop

流速：0.2mL/min
柱温：40℃
进样体积:2μL
离子源：电喷雾（ESI），正离子模式
检测方式：多反应监测（MRM）

表2质谱仪离子源参数

Source/Gas
Collision Gas(CAD)	10
Curtain Gas(CUR)	30
Ion Source Gas 1(GS 1)	50
Ion Source Gas 2(GS 2)	50
Ion Spray Voltage(IS)	5500
Temperature(TEM)	550
Interface Heater(ihe)	On

表3β-受体激动剂的母离子和子离子参数表

物质名称	保留时间（min）	监测离子对	DP	EP	CE	CXP
沙丁胺醇	3.86	240.1/147.8	60	10	18	12
沙丁胺醇	3.86	240.1/221.9	60	10	12	12
克伦特罗	5.82	277.1/202.9	60	10	23	12
克伦特罗	5.82	277.1/259.0	60	10	15	12
莱克多巴胺	5.45	302.1/163.7	60	10	23	12
莱克多巴胺	5.45	302.1/284.2	60	10	19	12
特布他林	3.77	226.0/151.7	60	10	16	12
特布他林	3.77	226.0/169.8	60	10	12	12
妥布特罗	6.17	227.9/153.8	60	10	16	12
妥布特罗	6.17	227.9/171.8	60	10	12	12

七、实验结果
1、0.5 ppb猪肉基质加标回收结果：

五种待测物的回收率均大于80%，RSD值小于5，符合标准要求。

表4猪肉中0.5ppb加标回收实验结果

名称	1（%）	2（%）	3（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
沙丁胺醇	88.62	82.79	81.45	84.29	4.52
克伦特罗	85.32	88.29	86.59	86.73	1.72
莱克多巴胺	86.56	88.33	81.36	85.42	4.24
特布他林	81.95	80.95	87.26	83.39	4.06
妥布特罗	82.64	82.56	88.14	84.45	3.79

2、空白样品中添加β-受体激动剂待测物色谱图