烟草中内源性组分的萃取净化方法

深海的天空

2015/08/18

私聊

液相色谱（LC）

除了要监控农药等有害物质的残留量，一些影响烟草品质的内源性组分如植物多酚、芳香胺等同时也要检测。植物多酚是烟草中的一类重要物质，其含量对烟草品质有重要影响，因而研究烟草及其制品中的植物多酚具有重要意义。通常的方法是用热甲醇水溶液对烟草中的多酚进行萃取，然后通过C18 SPE柱除去萃取物中弱极性脂类干扰物。
①烟草样品中植物多酚的固相萃取方法
烟样萃取：将烟样粉碎后过0．18 mm筛。取0．20 g，加入45 mL 80％(体积分数)甲醇水溶液，加热回流30 min。冷却后定容至50 mL。
固相萃取净化
SPE柱：Sep-Pak C18，Waters公司。
柱预处理：30 mL甲醇，30 mL水，10 mL／min。
样品过柱：5 mL上述甲水萃取液过柱，10 mL／min，弃去最初3 mL，收集后面2 mL。
馏分过滤：0．45μm针头过滤器过滤，HPLC分析。
②烟草中苯酚、儿茶酚固相萃取方法
烟草中挥发酚在烟草燃烧后会产生不好的气味。苯酚和儿茶酚对呼吸系统有腐蚀和助癌作用。因此，近年人们开始关注并监控烟草中挥发酚的含量。以下是固相萃取方法：
烟样萃取：20．00 g烟样，加入150 mL 2．5mol／L硫酸，加热回流l h，自动水气蒸馏仪以50％蒸汽量蒸馏15 min，收集其问的约230 mL馏分，加入1．7g磷酸二氢钾，调节pH至弱酸性，定容至250 mL。
固相萃取净化
SPE柱：Sep—Pak C18，30 mg，Waters公司。
柱预处理：15 mL甲醇，30 mL 0．05 mol／L磷酸二氢钾缓冲溶液。
样品过柱：50 mL上述样品过柱，10 mL／min。
柱干燥：离心除水。
目标物洗脱：2 mL 60％(体积分数)甲醇溶液。
HPLC分析：Nova-pak C18色谱柱，流动相A-甲醇，B-0.05mol／L磷酸二氢钾缓冲溶液。梯度洗脱，0min 80％B，10 min 20％B，15 min 20％B，20 min80％&流速0.5 mL／min。检测器：DAD，进样量10mL。
应用该方法对烟样进行萃取分析，回收率：苯酚91．8％～104．5％，儿茶酚89．6％～103．6％。
来源：中国标准物质网