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HPLC空白针梯度洗脱出现鬼峰等度洗脱又没有

  • 蝴蝶泉1234
    2018/04/26
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 安家的HPLC 最近走梯度洗脱时,空白针总是出现不知名的鬼峰,时间在11-13min之间,信号约5mAU,还会引起后面的基线波动,使用的流动相为乙腈和1%冰醋酸,梯度为:0-7.5min(乙腈30%),7.5-8.5min(乙腈30-60%),8.5-13.00min(乙腈60%),13-14min(乙腈60-30%);
    后来改变流动相,走空白,排查原因,结果如下:
    1. 100%纯乙腈流动相等梯度走乙腈空白,没有鬼峰;
    2. 乙腈:1%冰醋酸=30:70等梯度走乙腈空白,没有鬼峰;
    3. 乙腈:1%冰醋酸=60:40等梯度走乙腈空白,出现鬼峰,位置前移(5-9min),信号强度降低(0.25mAU左右)
    4. 采用上述乙腈与1%冰醋酸梯度洗脱走乙腈空白,又会出现上述鬼峰,位置、信号强度和以前一样;
    结果已经分析无力,难道是乙腈和冰醋酸比例不同带来了鬼峰吗?还望给位大神指点!
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  • 有水有渝

    第1楼2018/04/26

    应助达人

    这个鬼峰是极性比较弱的物质,只有在较高比例的乙腈下才能洗脱出来,乙腈:1%冰醋酸=60:40等梯度进水、1%醋酸,如果没有鬼峰,说明乙腈有问题。

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  • 夏天的雪

    第2楼2018/04/27

    应助达人

    影响分析吗?不影响就无视。至于原因,有水有渝老师进行了分析,可以考虑乙腈或者冰醋酸是否有问题

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  • 夏天的雪

    第3楼2018/04/27

    应助达人

    上个图看看,条件3走等度时也会引起后面基线的波动吗?

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  • moviehua

    第4楼2018/04/27

    应助工程师

    方便的话把峰图贴一下,0.25mau对你实验有影响?

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  • 蝴蝶泉1234

    第5楼2018/04/28

    您是怀疑乙腈的空白样里面有污染,所以将空白样换成水、1%冰醋酸是吗,但是用乙腈空白制样应该没有问题,是直接从大的溶剂瓶取得,另外如果乙腈污染,乙腈作为流动相,能够溶于乙腈中的杂质,应该也会随着乙腈一起被冲出来,应该也不会等到乙腈比例大的时候才被洗脱出来。还望老师详细说明

    有水有渝(xky0230699) 发表:这个鬼峰是极性比较弱的物质,只有在较高比例的乙腈下才能洗脱出来,乙腈:1%冰醋酸=60:40等梯度进水、1%醋酸,如果没有鬼峰,说明乙腈有问题。

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  • 蝴蝶泉1234

    第6楼2018/04/28

    我们怀疑过是不是冰醋酸有问题,于是把冰醋酸换成纯水,同样梯度下走乙腈空白,结果是同样位置出峰,而且是明显尖峰,信号强度减弱,降到1mAU 左右!鬼峰后面时间基线波动特别明显!

    夏天的雪(bingwang228) 发表:影响分析吗?不影响就无视。至于原因,有水有渝老师进行了分析,可以考虑乙腈或者冰醋酸是否有问题

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  • 夏天的雪

    第7楼2018/04/28

    应助达人

    比较奇怪,如果是气泡峰,应该不会这么规律,如果是梯度转换的峰,等度应该不出峰,如果是杂质峰,应该保留时间靠前,峰响应越高。进空针看看有没有峰,而且重复进空针试试,或者再接两通用该条件试试,还可以换柱子试。

    蝴蝶泉1234(Ins_6c9a2ded) 发表: 我们怀疑过是不是冰醋酸有问题,于是把冰醋酸换成纯水,同样梯度下走乙腈空白,结果是同样位置出峰,而且是明显尖峰,信号强度减弱,降到1mAU 左右!鬼峰后面时间基线波动特别明显!

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  • 夏天的雪

    第8楼2018/04/28

    应助达人

    如果乙腈中有杂质是有可能的,乙腈中的杂质在柱子中进行了保留,然后杂质被乙腈洗脱下来,乙腈比例越大,越容易被洗脱下来

    蝴蝶泉1234(Ins_6c9a2ded) 发表: 您是怀疑乙腈的空白样里面有污染,所以将空白样换成水、1%冰醋酸是吗,但是用乙腈空白制样应该没有问题,是直接从大的溶剂瓶取得,另外如果乙腈污染,乙腈作为流动相,能够溶于乙腈中的杂质,应该也会随着乙腈一起被冲出来,应该也不会等到乙腈比例大的时候才被洗脱出来。还望老师详细说明

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  • 蝴蝶泉1234

    第9楼2018/04/28

    在研究怎么贴个图上去,还在研究中!
    条件3的等度洗脱不会引起后面基线太大波动,但峰位置前移,大包峰;但如果采用梯度洗脱,峰型为尖峰,信号强,后面基线波动很大!

    夏天的雪(bingwang228) 发表:上个图看看,条件3走等度时也会引起后面基线的波动吗?

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  • 夏天的雪

    第10楼2018/04/28

    应助达人

    上个图看看,看一下峰后面的波动,同时注意一下出峰时候的压力,如果有压力波动,会出现基线不好

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