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浅谈氨基柱的使用与维护

言逊

2018/11/30

液相色谱（LC）

我先介绍下我们实验室使用氨基柱的姻缘，早在两年前，领导突然要求检测制剂药品中门冬氨酸辅料的含量，于是乎从网上找了一篇文献是关于做门冬氨酸的，看了看色谱柱：氨基柱，没用过的新柱子；找供应商买了一款氨基柱（phenomenex家的），一开始由于没有经验，就只是把它当普通的色谱柱来用，用着用着发现，一个月用个2-3次，柱子就用坏了；然后就找厂家的技术支持要资料，自己也上网查资料，总结了一下氨基柱的使用与维护，现在分享给大家：
我们实验室采购的是phenomenex LunaNH2氨基柱（色谱柱耐受pH 1.5-11.0）（我想其他品牌的氨基柱应该是有相同的共性的，希望有用过的大家补充补充）
1. 氨基柱是一款既可以正相使用，也可以反相使用，但是我们要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱出厂时保存在正相环境中，而Luna的氨基柱查找说明书是保存在正己烷-乙腈（99：1）中。
2. 如果大家是用于正相的体系：
2.1 推荐先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成你实验的流动相
2.2 正相使用时，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底脱气，并不得含有羰基化合物和过氧化物（质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量）
2.3 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶
3. 如果大家用于反相的体系：
3.1 由于新的氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中，与反相流动相是不互溶的，因此如果使用反相的方法，必须用至少10倍柱体积的异丙醇冲洗过渡（约2h，0.5mL/min），以除去正相保存溶液。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。
3.2 再用至少10倍柱体积95％水-5％乙腈（或甲醇）冲洗（不含缓冲盐的流动相可省去）过渡，最后用流动相平衡。
3.3 用完后洗柱时，必须先用95％水冲洗至少10倍柱体积，除去所用缓冲盐（不含缓冲盐的流动相可省去）。然后保存于乙腈/水（80：20）溶液（一个月内）中。长期不用的话，建议用异丙醇保存（一个月以上）。
3.4 新柱子一定要置换掉保存溶液，用异丙醇保存的柱子在使用前也需要花一定的时间给置换掉。
3.5 反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围（根据你色谱柱耐受使用pH），pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。
3.6 还有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。---------建议用10-15倍的柱体积的为pH=11 NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。
3.7 柱子再生：
以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH10.0的氨水或氢氧化钠水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再乙腈/水（80：20）溶液冲洗保存。
最后谈一下平衡的问题，我们用的最多的是反相体系，正相体系不是很清楚（见谅）；一开始我们以为2-3小时就可以稳定了，其实不然，后来经过不断的折腾，发现至少12个小时，你的系统才能稳定下来（我们碰到过平衡时间不够，进了几十针标准品，样品出峰时间以0.02min/针的形式，从最初的12.8min漂移到15.2min）。
希望对广大用氨基柱的论友们有所帮助！

分
该帖子已被版主-夏天的雪加2积分，加2经验;加分理由:经验分享

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dadgoh

第1楼2018/11/30

应助达人

对使用氨基柱的版友很有帮助。

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言逊

第2楼2018/11/30

应助达人

谢谢支持！
dadgoh(dadgoh) 发表:对使用氨基柱的版友很有帮助。

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检测老菜鸟

第3楼2018/11/30

应助达人

这个很有用

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言逊

第4楼2018/11/30

应助达人

??谢谢老鸟支持
检测老菜鸟(v3295053) 发表:这个很有用

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夏天的雪

第5楼2018/11/30

应助达人

不错，也看到一些资料，说用氨水可以再生，确实可行吗？这个pH值对柱子有没有伤害的

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言逊

第6楼2018/11/30

应助达人

还是要根据你柱子的pH耐受来看，少量的是没问题的
夏天的雪(bingwang228) 发表:不错，也看到一些资料，说用氨水可以再生，确实可行吗？这个pH值对柱子有没有伤害的

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言逊

第7楼2018/11/30

应助达人

谢老夏支持
夏天的雪(bingwang228) 发表:不错，也看到一些资料，说用氨水可以再生，确实可行吗？这个pH值对柱子有没有伤害的

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lijing320323

第8楼2018/11/30

学习了，实用

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言逊

第9楼2018/11/30

应助达人

相互学习，少走弯路！
lijing320323(lijing320323) 发表:学习了，实用

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Insm_e2ae667b

第10楼2019/04/13

非常感谢，第一次用氨基柱。

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