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【实战宝典】液相色谱测定氨基甲酸酯的注意事项有哪些？

小官人

2021/03/23

液相色谱（LC）

问题描述：按NY/T 761-2008检测涕灭威亚砜和涕灭威砜，色谱柱为氨基甲酸酯分析专用柱3.9mm×150mm，进样量10μL，优化了梯度脱洗程序。结果色谱峰宽1min，且拖尾，涕灭威亚砜和涕灭威砜无法分开，怎样解决？柱后衍生水解温度是100℃，怎样进行OPA衍生化反应？荧光检测器的灵敏度是否与样品的温度相关？

解答：（1）导致峰宽的原因主要有以下几个方面：

a.流动相有机相比例或流速低造成从色谱柱上洗脱目标物时间过长；

b.柱外效应影响，主要是柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大导致“死体积”过大；

c.色谱柱本身受到污染导致柱效降低或色谱柱填料选用不合适。

（2）液相色谱柱后衍生法测定氨基甲酸酯农药的标准有NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》和GB 23200.112- 2018《食品安全国家标准植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-柱后衍生法》。前者推荐的色谱柱包括C₁₈、C₈两种，而后者推荐的只有C₈一种，考虑到涕灭威亚砜和涕灭威砜极性较强，用极性比C₁₈键合相稍强的C₈分析柱理论上对极性强的组分能得到更好的分离度。

（3）标准中推荐的色谱柱长度都为250mm，而非150mm，建议改用250mm色谱柱。甲醇的洗脱能力比乙腈要弱一些，流动相有机相部分改用乙腈或甲醇/乙腈混用应该能有效减小峰宽。不少文献资料都对这两个标准中的流动相组成、梯度洗脱程序进行了优化，可以参考这些条件再根据具体情况进一步优化。

（4）氨基甲酸酯类柱后衍生包括两个反应器：一个用于水解，温度要求100℃；另一个衍生，要求室温，按照要求设定即可。荧光检测器的灵敏度与样品的温度没有太大关系，色谱柱温度按标准设定42℃就可以。

（5）该实验还需要注意：上机标样和样品不要用纯有机相溶解，否则出峰靠前的如涕灭威亚砜和涕灭威砜容易产生溶剂效应，一般用50%有机相溶解。每次进样前色谱柱平衡时间要足够长，普通HPLC最好达到20min以上。OPA衍生试剂对氧敏感，易降解，打开后尽量24h用完；OPA稀释用试剂四硼酸钠要用优级纯以上（最好色谱纯），防止重金属离子和不溶物质沉淀在反应器和流通池中，造成结晶堵塞。

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