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S-腺苷-L-蛋氨酸的含量测定

  • SH104301
    2021/10/14
    仪信通会员战队
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 背景

    腺苷蛋氨酸(SAM)是存在于人体所有组织和体液中的一种生理活性分子。它作为甲基供体(转甲基作用)和生理性巯基化合物(如半胱氨酸、牛磺酸、谷胱甘肽和辅酶 A 等)的前体(转硫基作用)参不体内重要的生化反应。在肝内,通过使质膜磷脂甲基化而调节肝脏细胞膜的流动性,而且通过转硫基反应可以促进解毒过程中硫化产物的合成。只要肝内腺苷蛋氨酸的生物利用度在正常范围内,这些反应就有助于防止肝内胆汁郁积。

    S-腺苷-L-蛋氨酸 ,ATP的参与下甲硫氨酸经甲硫氨酸腺苷转移酶催化而成,在甲基转移酶的作用下,去掉一个甲基形成S-腺苷同型半胱氨酸(SAH),高效液相色谱HPLC)适用于SAM的含量检测,依据其相应的色谱条件进样分析,进行含量测定。

    实验材料与方法

    1.样品预处理:


    SAM标准曲线样品制备:将标准品32 mM SAM,用流动相逐级对半稀释成:0.25 mM , 0.5 mM , 1 mM , 2 mM ,4 mM (注意所有操作需在冰盒上操作,标准品SAM需涡旋仪混匀再使用,每个点稀释后也需混匀);标准品稀释完需离心取上清20 μl至样品瓶的带内衬管中,标记为标准曲线样品。

    待检样品制备:将待检样品先离心取上清,以预估样品的理论含量,用流动相将样品稀释至1 mM,需做平行样对比(注意所有操作需在冰盒上操作,稀释过程也需混匀);取处理好的待检样品20 μl至样品瓶的带内衬管中,标记为样品。

    标准样品:将标准品稀释至1 mM,同时做平行样品;取处理好的标准样品稀释液20μl至样品瓶的带内衬管中,标记为标准样品,验证方法和检测的可靠性。

    2.仪器

    液相色谱waters-型号:E2695-2489

    台式离心机(卢湘仪)-型号:TG16A-WS

    移液器(艾本德) -型号:20-200 μl

    电子天平(梅特勒)-型号:Five Easy Plus

    3.色谱分析条件

    仪器系统:waters 2695-2489

    色谱柱:ChromCore 120 C18, 5μm 4.6*250mm

    检测波长:260 nm

    柱温:26±3

    流速:1 ml/min

    进样体积:10 μl

    流动相: A液:5%甲醇(含0.1%冰醋酸)

    洗脱方式:等度洗脱

    洗脱时间:20 min



    采用等度洗脱(需依据不同厂家的色谱柱自行优化)

    时间(min

    A%

    B%

    C%

    D%

    流速ml/min

    最大压力限值psi

    0

    100

    0

    0

    0

    1.00

    2500



    实验图谱

    0.25 mM SAM标准品(a


    0.5 mM SAM标准品(b


    SAM检测样品(c



    注:以上为SAM标准品(a(b)和检测样品(c)色谱图



    实验结论

    将逐级稀释的标准品的各个含量,进样后得出其对应的峰面积,绘制成峰面积(y)与含量(x)标准曲线, 如以下图为,SAM标准品(0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM, 2 mM, 4 mM)峰面积与浓度含量的曲线图。如图所示,曲线 R2值应≥0.99,将SAM待测样品的峰面积带入到标准曲线里,得出相应的实际含量。





    公司名称:苏州近岸蛋白质科技股份有限公司

    个人信息:×老师

    色谱柱信息:

    纳谱分析ChromCore 120 C18 5μm, 4.6mm×250mm, 序列号:11538-002536
    +关注 私聊
  • zyl3367898

    第1楼2021/11/13

    应助达人

    条理清晰,图谱清楚。

0
    +关注 私聊
  • Ins_3f6c1afd

    第2楼2023/05/24

    你好,请问色谱柱可否用以下的代替

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