细胞冻存的注意事项

lijing320323

2023/05/09

私聊

PCR

细胞冻存是细胞培养的关键步骤，一般推荐的冻存液比例为：1：3：6（或1：2：7）配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态良好的细胞进行冻存处理，小编实验室有一个秘密配方，就是10%DMSO和90%的纯血清，这个冻存液有一些奢侈，但是对于一些比较脆弱的细胞，或者是一些冻存条件比较差的实验室（例如没有-80冰箱）有非常良好的效果。

除此之外和大家分享六大注意事项

1、错误的时机：

细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。

解决：

最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好，复苏后两周内。

2、细胞太少：冻存时细胞浓度低于1-5×1000,000/ml。（复苏很难成功）。

解决：离心后调整细胞浓度。（不要重新洗细胞）。

3、盖子不紧：冻存管的盖子一定要拧紧，否则复苏水浴时会渗水，造成污染。

解决：选择原配的管子和盖子（不同牌子/型号的颜色会有差别）。

4、单薄的冻存盒：放在－80度的冻存盒，壁太薄，细胞在被迅速降温。

解决：选择厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。（冻存的原则：缓降！）。

5、-80度太久：放在－80度冰箱的时间超过半年。（冰箱的温度难以恒定:开门/关门，电压不稳等）

解决：尽快转入液氮。
6、液氮不足：液面不能漫过所有细胞。

解决：定期测量液氮储备，保证细胞全部浸在液面下。