食品维生素E(α-TE)检测分析
概述:
食品按照GB 5009.82-2016《食品安全国家标准 食品中维生素 A、D、E的测定》第一法 食品中维生素A和维生素E的测定 反相高效液相色谱法检测维生素E含量。GB 29923-2013要求成品应检测维生素E(α-TE)含量。GB 14880-2012要求维生素E与维生素E(α-TE)转换时,应带入系数进行折算。对产品维生素E与维生素E(α-TE)检验结果进行分析,GB 29922-2013的规定。
1、检验方法分析
1.1、实验过程使用Sigma生产的α-生育酚(C29H50O2)标准品,CAS号为10191-41-0,标准溶液配制、样品前处理过程,均符合GB 5009.82-2016的要求。
1.2、按照GB 5009.82-2016中(6)分析结果的表述,检测结果为试样中的维生素E含量。如维生素E的测定结果要用α-生育酚当量(α-TE)表示,按照维生素E(mgα-TE/100g)=α-生育酚 (mg/100g)+β-生育酚(mg/100g)×0.5+γ-生育酚(mg/100g)×0.1+δ-生育酚(mg/100g)×0.01。润能产品中维生素E来源于食品营养强化剂dl-α-醋酸生育酚,符合GB 14756-2010的规定。产品中不含有β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚。
2、检验方法分析
2.1、检验检测方法依据:GB 5009.82《食品安全国家标准 食品中维生素A、D、E的测定》第一法 食品中维生素A和维生素E的测定 反相高效液相色谱法。
2.2、仪器与用具:高效液相色谱仪、电子天平、紫外可见分光光度计、隔膜真空泵、溶剂过滤器、恒温振荡器、旋转蒸发器、平底烧瓶、量筒、分液漏斗、pH试纸(pH范围1~14)、滤纸、漏斗、旋转蒸发瓶、滴管、容量瓶、移液管、刻度吸管、氮吹仪、0.22μm有机系滤膜。
2.3试剂:甲醇(色谱纯)、无水乙醇、抗坏血酸、氢氧化钾溶液(50g/100g)、石油醚(30℃~60℃)、无水硫酸钠、2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)。
3、操作方法
3.1、色谱柱:C18柱(柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm),或相当者;柱温:30℃;流动相:甲醇;流速:0.8mL/min;紫外检测波长:维生素A为325nm;维生素E为294nm。
3.2、标准溶液配制:维生素A标准储备溶液(0.500mg/mL):准确称取25.0mg维生素A标准品,用无水乙醇溶解后,转移入50mL容量瓶中,定容至刻度,此溶液浓度约为0.500mg/mL(或同等配制成浓度为0.500mg/mL的维生素A标准储备溶液)。将溶液转移至棕色试剂瓶中,密封后,在-20℃下避光保存,有效期1个月。临用前将溶液回温至20℃,并进行浓度校正。
3.3、标准溶液配制:维生素E标准储备溶液(1.00mg/mL):准确称取α-生育酚50.0mg,用无水乙醇溶解后,转移入50mL容量瓶中,定容至刻度,此溶液浓度约为1.00mg/mL(或同等配制成浓度为1.00mg/mL的维生素E标准储备溶液)。将溶液转移至棕色试剂瓶中,密封后,在-20℃下避光保存,有效期6个月。临用前将溶液回温至20℃,并进行浓度校正。
3.4、维生素A和维生素E混合标准溶液中间液:准确吸取维生素A标准储备溶液1.00mL和维生素E标准储备溶液5.00mL于同一50mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,此溶液中维生素A浓度为10.0μg/mL,维生素E浓度为100μg/mL。
3.5、维生素A和维生素E标准系列工作溶液:分别准确吸取维生素A和维生素E混合标准溶液中间液0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL于10mL棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度,该标准系列中维生素A浓度为0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、4.00μg/mL、6.00μg/mL,维生素E浓度为2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、60.0μg/mL。临用前配制。
3.6、试样制备:称取50g(精确至0.01g)试样于150mL平底烧瓶中,再加入1.0g抗坏血酸和0.1gBHT,混匀,加入30mL无水乙醇,加入10mL~20mL氢氧化钾溶液,边加边振摇,混匀后于80℃恒温水浴震荡皂化40min,皂化后立即用冷水冷却至室温。(注:皂化时间一般为30min,如皂化液冷却后,液面有浮油,需要加入适量氢氧化钾溶液,并适当延长皂化时间)将皂化液用30mL水转入250mL的分液漏斗中,加入50mL石油醚(30~60℃),振荡萃取5min,将下层溶液转移至另一250mL的分液漏斗中,加入50mL的石油醚(30~60℃)再次萃取,合并醚层。用约100mL水洗涤醚层,约需重复3次,直至将醚层洗至中性(可用pH试纸检测下层溶液pH值),去除下层水相。将洗涤后的醚层经无水硫酸钠(约3g)滤入250mL旋转蒸发瓶中,用约15mL石油醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠2次,并入蒸发瓶内,并将其接在旋转蒸发器上,于40℃水浴中减压蒸馏,待瓶中醚液剩下约2mL时,取下蒸发瓶,立即用氮气吹至近干。用甲醇分次将蒸发瓶中残留物溶解并转移至50mL容量瓶中,定容至刻度。溶液过0.22μm有机系滤膜后供高效液相色谱测定。
3.7、将试样溶液20μL注入高效液相色谱仪进行分析,测得峰面积,采用外标法计算其浓度。
4、结果分析
按照方案维生素E含量进行检验,结果如表1:
对检验结果进行分析,三批次产品平行12个点(时间段)考察,维生素E含量没有降解趋势,结果符合GB 29922-2013的规定。
维生素E和维生素E(α-TE)转换按照GB 14880-2012问答(十六、关于营养强化剂的使用量,例2维生素E:本标准规定维生素E的使用量是以“d-α-生育酚”计,相应的换算系数如下:1mg dl-α-生育酚=0.74 mg d-α-生育酚),即维生素E转换为维生素E(α-TE)需要乘以系数0.74,对3批次工艺验证样品维生素E(α-TE)含量进行计算,结果如表2:
将维生素E含量乘以系数0.74,转换为维生素E(α-TE),计算结果仍然符合GB 29922-2013的规定。
原则上GB 14880-2012要求维生素E与维生素E(α-TE)转换时,应带入系数进行折算。所以大家在检验时候需要注意,标准中维生素E与维生素E(α-TE)绝对不是一回事。