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【求助】救命呀,我的柱子老出问题

液相色谱(LC)

  • 我做的一个样品,药典上的,液相为导津10的,以前做的还可以,最近老是出问题,具体如下:
    色谱条件:0.01mol/L磷酸氢二铵溶液(用磷酸调pH至7.0)-乙腈(50:50)为流动相。
    问题:经常会在流动相和对照品(一般不超过两天)有东西析出 ,前一段时间突然出问题了。首先是柱子拖尾,后来是由出现峰分叉,后来就换了一根柱子,用了几天后,又出现柱压高的不行,在换了柱子后又过几天又出现有分叉,前一天还好好的,一般情况下,都没什么预兆,看了网上的帖子,猜想可能是柱头堵了,可是没什么办法,因为我刚刚开始做分析,什么都不懂,所以请大家帮帮忙,谢谢。很急。
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  • 深海的海豚

    第1楼2007/05/03

    使用高浓度的缓冲盐的流动相最重要的是对柱子的冲洗和保养;从你说的情况来看,可能是盐析出看看是不是柱头塌陷了,注意你使用的色谱柱的说明,是否使用,pH范围是多少,如果按照你说的这个配比,流动相pH应该远大于7,所以,是否也有柱头溶解的可能?需要拆开看看。
    如果是前一天还好好的,之后一下子就不好了,那应该考虑你冲柱子是否正确了,否则不会如此快的损坏的,新柱子要测试一下柱效,看看是否真的是现在比原来柱效差很多。
    此外,最好使用保护柱。
    这种配比的流动相应该不会很伤柱子,通常是使用的问题。

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  • 神曲

    第2楼2007/05/03

    流动相配比是药典上的还是经过你自己调整过的?

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  • henryltfg

    第3楼2007/05/03

    1.流动相是否经0.45um的虑膜过滤。
    2.测试完后用水和甲醇冲洗柱,不洗干净会盐析的,柱压会高,柱效降低。
    3.考虑你的样品中的杂质能否用流动相和甲醇与水洗脱。
    你描述的现象不是盐析就是杂质在柱上积累。

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  • chiyao

    第4楼2007/05/04

    请问各位,怎样解决呀

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  • 老庆仔

    第5楼2007/05/17

    我以前用十二烷基磺酸钠加磷酸二氢钾配制流动相,然后用磷酸调节PH值的时候也遇到过会有结晶析出的情况.最后确认为试剂本身纯度的问题.原先是用国产的,后来改用进口的,问题就解决了.就是价格贵了好多.但实验能做好,比什么都重要.
    在使用缓冲盐做流动相的时候,除了试剂要用好的以外,过滤也很重要!我一般都用0.22um的滤膜.

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  • leixue

    第6楼2007/05/18

    我做液相的时候也发现新柱子也分叉不过是溶剂峰叉了,样品峰倒是正常的

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  • sacifice

    第7楼2007/06/01

    我前段时间做了0.05%十二烷基磺酸钠和甲醇配比的,每次完了以后都用纯水冲半小时在换甲醇和纯水冲,柱子没有什么问题 看楼主的样子可能是没用纯水冲吧

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  • bwaic163

    第8楼2007/06/01

    缓冲盐就是要注意了.

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  • 立静致远

    第9楼2007/06/01

    用纯水冲半个小时对C18柱来说不太合适吧.我通常用5%的甲醇水溶液代替纯水冲洗柱子

    sacifice 发表:我前段时间做了0.05%十二烷基磺酸钠和甲醇配比的,每次完了以后都用纯水冲半小时在换甲醇和纯水冲,柱子没有什么问题 看楼主的样子可能是没用纯水冲吧

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  • quan0591

    第10楼2007/06/02

    若是预柱头堵了可以先反冲,实在无法恢复可以换个柱芯

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