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【金秋计划】四种常用色谱柱的活化、清洗、再生和保存
Ins_f4d68f68
2024/09/06
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其他色谱仪综合讨论
正确合理地使用不同类型的色谱柱,不仅可以提高色谱柱的使用效率,还可以延长色谱柱的使用寿命。
(1)反相色谱柱(C18柱)。
活化:先用100%甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积,再用50%乙腈或甲醇冲洗10个柱体积,最后用流动相平衡10个柱体积。
清洗:使用完毕后,立即使用高比例有机相冲洗20个柱体积,然后使用100%有机相冲洗20个柱体积。
再生:极性样品分析完毕后,依次使用蒸馏水、甲醇四氢呋喃、甲醇、蒸馏水分别冲洗20个柱体积;非极性样品分析完毕后,依次使用异丙醇、四氢呋喃、二氯甲烷、正己烷、异丙醇分别冲洗20个柱体积。
保存:使用甲醇或乙腈。
(2)正相色谱柱(氨基柱、氰基柱)。
活化:正相色谱分离条件时,使用流动相平衡20-30个柱体积;反相色谱分离条件时,先使用100%异丙醇或乙醇冲洗50-100个柱体积,再用流动相平衡20-30个柱体积。
清洗:先使用100%异丙醇冲洗50个柱体积(低流速),再使用100%甲醇冲洗50个柱体积,最后使用异丙醇过渡到正相流动相条件进行清洗。
再生:正相使用后再生依次使用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇分别冲洗20个柱体积;反相使用后依次使用95%乙腈+5%蒸馏水、四氢呋喃、95%乙腈+5%蒸馏水分别冲洗10-20个柱体积,再用95%乙腈+5%蒸馏水低流速过夜冲洗。
保存:使用异丙醇或正己烷。
(3)亲水作用色谱柱(HILIC,Amide)
活化:先用50%-60%乙腈冲洗50个柱体积,再用流动相平衡20个柱体积,使用梯度洗脱时,进样间隔也需要用流动相平衡10个柱体积。
清洗与再生:使用50%乙腈清洗除去极性污染物,如清洗不充分,可适当加大水相比例进行冲洗,当水相比例过高时,应注意柱压,适当降低流速。
保存:如果超过4天不使用色谱柱,可使用95%乙腈保存色谱柱;如果流动相中含有缓冲盐,可以先使用蒸馏水冲洗10个柱体积,再使用95%乙腈保存。
(4)离子交换色谱柱(SAX,SCX)
活化:先用100%甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积,再用流动相平衡10-20个柱体积。
清洗:先使用蒸馏水冲洗30个柱体积去除缓冲盐,再使用100%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积,最后保存在50%甲醇或乙腈中。
再生:先使用高浓度盐的缓冲液进行清洗,再依次使用蒸馏水、100%乙腈进行冲洗,最后保存在50%乙腈中。
保存:使用甲醇,40%有机相。
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