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【金秋计划】芽孢染色法

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    2024/09/06
  • 私聊

食品常规理化分析

  • 一、实验原理

    1.适用范围:芽孢染色法适用于能够形成芽孢的各类芽孢杆菌。

    2.原理:

    (1)芽孢染色法属于复染色法,是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理,用不同染料进行着色,使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。

    (2)芽孢壁厚、透性低,着色、脱色均较困难,因此,当先用一弱碱性染料,如孔雀绿或碱性品红在加热条件下进行染色时,此染料不仅可以进入菌体,而且也可以进入芽孢,进入菌体的染料可经水洗脱色,而进入芽孢的染料则难以透出,若再用复染液(如番红液)或衬托溶液(如黑色素溶液)处理,则菌体和芽孢易于区分。
    (3)芽胞具有高度的折光性,外膜致密,渗透性低,故普通染色法不易使其着色,芽胞染色法是根据芽胞既难以着色,而一旦着色又难以脱色的特点设计的。所有芽胞染色法都基于同一个原则:采用着色力强的染料,并加热以促进标本着色,然后使菌体脱色,而芽胞上的染料仍保留,经复染后,菌体和芽胞呈现不同的颜色。

    二、染液的配制

    1.5%孔雀绿水溶液:孔雀绿5.0g,蒸馏水100mL。

    2.0.5%番红溶液:番红O(safranine,又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。

    三、应用

    芽孢染色法是生物学和医学领域中常用的实验技术,用于观察和研究细胞的结构和功能。芽孢的大小、形状及其在菌体内的位置是鉴别细菌的重要依据。

    四、实验步骤


    1.:取洁净的载玻片,在载玻片上滴加一滴生理盐水,然后用接种环蘸取少量芽孢菌跟水混匀,晾干,用酒精灯固定。

    2.浸染:将固定好的涂片放入含5%孔雀绿水溶液的50℃水浴染色缸中,浸染15min。或者在涂片上滴加孔雀绿,用酒精灯加热,切勿干涸,要保持涂片湿润。


    3.冲洗:取出载玻片,用水冲洗多余染液,直至出水无色为止。

    4.复染:0.5%碱性番红复染1min。

    5.冲洗:用水冲洗多余染液,直至出水无色为止,晾干。

    6.镜检:先低倍镜找到区域后,换油镜观察芽孢和菌体。菌体呈红色或粉色,而芽孢呈绿色。

    五、注意事项和操作技巧

    1.选用适当菌龄的菌种,幼龄菌尚未形成芽孢,而老龄菌芽孢囊已经破裂。  

    2.加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态,加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂,加热不够则芽孢难以着色。加热过程中要及时添加染色液,切勿让标本干涸。

    3.芽孢观察也可以直接使用简单染色法。比如用番红或结晶紫染色后,芽孢不着色,菌体染色。
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