ABPP技术近年来被广泛用于揭示天然活性分子的作用靶标,如黄芩苷、青蒿素、辣椒素及姜黄素等等,利用该技术可以实现对花色苷与蛋白质结合模式的深入探究。首先选择了最优活性的C3G进行修饰,将可点击的炔基引入C3G的A环,再根据此前开发的全合成路线(Org. Lett. 2023,25, 13, 2289–2293),获得了共价结合探针C3G-Probe和非共价光亲和探针C3G-Diazirine。探针识别靶蛋白后,炔基通过点击化学与荧光染料或生物素连接的叠氮基发生反应。对于非共价分子,需要额外的光亲和基团和紫外光照才能形成稳定的标记。荧光染料直接表征探针的标记,而生物素通过链霉亲和素富集靶蛋白。进一步用胰蛋白酶消化,并通过LC-MS/MS进行鉴定。