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新手小白 第一次准备用GPC 收集了很多问题 望大佬解答

  • 时间000000
    2024/10/08
  • 私聊

凝胶色谱(GPC)

  • 测定多糖的分子量与分子量分布,稀释剂是水
    供试品的分子量范围在1000~50000
    目前是外送测了一次,外送用的色谱柱排阻限是1000000Da(普鲁兰)和20000000Da(普鲁兰)串联

    现在想我们自己进行检测,用赛默飞的液相和示差检测器,色谱柱目前有1000000Da(普鲁兰),和TSKgel G2500PWXL(查资料是排阻限3000Da(聚乙二醇))
    1、色谱柱的选择
    外送检测用的色谱柱排阻限是不是太大了,色谱柱该怎么选择,排阻限到底是什么意思,色谱柱该怎么串联,先排阻限小再排阻限大再流线向检测器吗?
    2、分子量标准品的选择
    目前准备用右旋糖苷做标准品,中检院的这个标准品,,标准品该怎么配制后进样呢,如果都配制成1mg/ml,称10mg-10ml,不就稀释了吗,还有我看有的文献会配制宽分布和窄分布标准品,这个又是什么意思,不是进六个标准点做标准曲线就可以了吗,还有供试品的浓度该怎么选择,需要重均分子量或数据分子量在线性点的中间吗?
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  • 时间000000

    第1楼2024/10/09

    我知道色谱柱该怎么串联了,又没有好心人指导一下我溶液该怎么配啊

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  • 骑乌龟去流浪

    第2楼2024/10/10

    1、聚合物分散性,是指分子量分布宽度,一般用PDI表示,以重均数均比Mw/Mn来表示,PDI=1表示其为单分散性,一般1.03~1.05也近似认为单分散,单分散的标准品成为窄标(窄分布标准品),如聚苯乙烯之类的PDI<1.1,它的分布图形接近于正态分布。反之多分散性比较宽的,即PDI比较大的标准品,称为宽标(宽分布标准品),PDI1.2~3.0称为中等宽度分布,有时将PDI>2的归为宽分布,如聚乙烯聚丙烯之类的合成聚合物,PDI能有20~30或更高,或者多糖、淀粉糖之类的天然产物,这些分布几乎没有是正态分布的。
    2、标准曲线点通常要把样品的出峰时间点包含在内。样品的制备浓度跟样品的分子量有关,如果分子量小的,可以适当配高浓度,分子量大的配低浓度。我们一般分子量<5000,配<1.0%;分子量5000-25000,配<0.5%;分子量200-40万,配<0.25%;分子量200-200万,配<0.2%;分子量达1000万,配0.05%,根据实际信号调整浓度和进样量,进样量通常20~50μL。

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  • 时间000000

    第3楼2024/10/10

    太谢谢您了

    骑乌龟去流浪(v2781583) 发表:1、聚合物分散性,是指分子量分布宽度,一般用PDI表示,以重均数均比Mw/Mn来表示,PDI=1表示其为单分散性,一般1.03~1.05也近似认为单分散,单分散的标准品成为窄标(窄分布标准品),如聚苯乙烯之类的PDI<1.1,它的分布图形接近于正态分布。反之多分散性比较宽的,即PDI比较大的标准品,称为宽标(宽分布标准品),PDI1.2~3.0称为中等宽度分布,有时将PDI>2的归为宽分布,如聚乙烯聚丙烯之类的合成聚合物,PDI能有20~30或更高,或者多糖、淀粉糖之类的天然产物,这些分布几乎没有是正态分布的。
    2、标准曲线点通常要把样品的出峰时间点包含在内。样品的制备浓度跟样品的分子量有关,如果分子量小的,可以适当配高浓度,分子量大的配低浓度。我们一般分子量<5000,配<1.0%;分子量5000-25000,配<0.5%;分子量200-40万,配<0.25%;分子量200-200万,配<0.2%;分子量达1000万,配0.05%,根据实际信号调整浓度和进样量,进样量通常20~50μL。

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  • 骑乌龟去流浪

    第4楼2024/10/11

    不客气,注意不要让空调风直吹RID检测器,桌面最好不要同时放振动比较大的其它设备,会影响基线稳定性。把废液瓶放到与检测器同一个高度或者略高于检测器增加背压,有利于基线快点达到平衡。

    时间000000(Ins_0344faa5) 发表: 太谢谢您了

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  • 时间000000

    第5楼2024/10/11

    好的好的,还有个问题想请教一下您,这个方法和普通的含量和有关物质的液相方法不一样,方法学验证的内容是不是也不一样?

    骑乌龟去流浪(v2781583) 发表: 不客气,注意不要让空调风直吹RID检测器,桌面最好不要同时放振动比较大的其它设备,会影响基线稳定性。把废液瓶放到与检测器同一个高度或者略高于检测器增加背压,有利于基线快点达到平衡。

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  • 骑乌龟去流浪

    第6楼2024/10/11

    因分子量测试不属于含量测试,所以无法做回收率的准确度验证,我们这边聚合物只做系统适用性专属性、精密度、耐用性这些

    时间000000(Ins_0344faa5) 发表: 好的好的,还有个问题想请教一下您,这个方法和普通的含量和有关物质的液相方法不一样,方法学验证的内容是不是也不一样?

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  • 时间000000

    第7楼2024/10/11

    好的,多谢!

    骑乌龟去流浪(v2781583) 发表: 因分子量测试不属于含量测试,所以无法做回收率的准确度验证,我们这边聚合物只做系统适用性专属性、精密度、耐用性这些

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