牛爸爸虎儿子
第4楼2007/05/24
如何平衡色谱柱?
· 在拿到一根新的色谱柱时,应首先用0.2ml/min的流速将色谱柱平衡过夜,然后将流速升高到1.0ml/min冲洗30分钟,以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态,这样可以保证色谱柱的使用寿命,并且保证在以后的使用中,获得分析结果的重现性。
· 平衡过程中,将流速缓慢地提高
· 用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低,则需要较长的时间来平衡)
色谱柱的再生
色谱柱在使用一段时间后柱效会下降,这时可以考虑对色谱柱进行再生。
进行色谱柱再生时,应使用一个廉价的泵,我们建议:最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
表1 建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积
125-41.6ml30ml
250-43.2ml60ml
250-1020ml400ml
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第6楼2007/05/24
注意:
*在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能成铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,用0.05M的硫酸冲洗非常有效。
色谱柱的维护:
1. 使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)
2. 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围
3. 避免流动相组成及极性的剧烈变化
4. 流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5. 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕将柱子冲洗干净,并保存在乙腈中
6. 压力升高是需要更换预柱的信号