【求助】新手求助，关于HPLC的诸多问题，非常感谢

根据相似相溶调节流动相。

1 可以查阅相关文献，如含量测定等的文献，或者看看药典等，色谱条件如流动相、色谱柱、检测器等是什么，然后根据自己手头现有的条件，来摸索流动相的具体比例和组成。
2 具体怎么做就是要保证你测定的样品没有干扰、重现性、峰形等良好，能够满足你的检测要求，在这样的前提下，样品保留时间尽量短些，这样有利于大批量进样。如果是反相柱，一般有机相比例越高，样品保留时间越短，但是不利于样品间的分离，如果两个峰靠的近，就需要降低有机相的比例，有时候也可以调节流动相的pH值、或是换色谱柱等。
3 定量限就是满足信噪比为10时的样品浓度，检测限就是信噪比为3时的样品浓度。信噪比一般的工作站中可以计算得出。
4 内标最好选择与样品结构性质相近的物质，一般选用样品的同系物，但是内标不能干扰样品的出峰，且要稳定。如果没有，有时也可以选择其他的在你的色谱条件下能出峰，且满足前面的条件的物质。在样品前处理时，内标也要有稳定的回收率才行。

1.做实验首先当然是查文献，手段有很多啊，国内外都有
2.已经成型的色谱条件你要看它的优缺点进行改进，多看文献就知道了
3.定量限和检测限是怎么做的，老师没教吗？
4.内标物通常很难选，自己选我想要很久，不行就外标法

好的 谢谢

非常感谢！

1、如果文献查不到就用比较常用的流动相试试，甲醇和水或乙腈和水都可以。
2、如果分离不好可以调一下流动相的配比或降低流速。
3、我没记错的话是噪音的三倍（书中有介绍的）。此时信号对应的浓度就是检出限了。
4、内标物最起码的要求是在检测条件下能够与已知物分离。

中药抗炎作用与对大鼠腹腔巨噬细胞产生白三烯B4及5—HETE的影响，天津医科大学学报，1996年2卷1期楼主的问题似乎有现成的答案呀，感觉超级幸福呢。

第二个问题：改变洗脱条件是一个系统工程呢（要考虑流动相组成，洗脱梯度变化速率，填料，柱子长短及柱效选择，温度，检测条件等等），不太好一句话概括。首先要找到为什么要改变条件，原有条件是分离度不够还是拖尾又或者其他原因，才好对症下葯，单纯为了改变而改变没什么意义的。
第三个：检出限是达到背景噪音的三倍响应值的目标物质的量，定量限是达到背景噪音的10倍响应值的目标物质的量，不同的物质，不同的柱子，不同的流动相，不同的检测器，这个值自然是不断变化得了
第四个问题：忘了什么问题，我再看看先

内标超级难选，楼主这两个东西偶不熟，不敢瞎说，一般原则楼上的都说了，不在重复