【求助】紧急求助(黄芩苷含量测定的问题）

楼主用的是哪家的柱子啊？

岛津原装的，刚用不久，柱子应该没问题的！！

应助达人

建议在276下连续进样试试，不要每进一个都换波长，因为换了检测波长，无法确定你检测到的色谱峰表达的是同一个物质。管路上有没有漏液，压力，流量正常吗？

如果有很小的漏液（比如流通池有漏），系统会报警吗？选择在276下进样是不是因为药材是在276下检的？但是这改变了标准规定的测量波长，会对检测结果有大的影响吗？

在276波长下进了三针对照品，保留时间分别为12.798、15.223、22.365，但峰面积相差无几的，为什么会这样？我测了下流速是正常的！！！然后我进样品，保留时间就更离谱了，直接45.658，我还以为不是呢，做了个加标，可以确认是目标峰，这究竟是什么原因造成的呢？
再者，我发现我今天做的系统压力比昨天的低了近20kgf(2MPa)[当然流动相比例也没变动]，如果是有漏的话机子应该会报警，但运行是正常的，这又是什么原因？哪个地方磨损了？不密封？？？

应助达人

276不是规定的检测波长吗？是不是色谱柱没有平衡好，或是样品污染很大，每进一次都有很大的污染，使用保留时间无法重复。

第一、我今天打开空调再重新做了下，以前没开空调做的，室温大概是25度，以前室温只有差不多15度的样子，室温相差10度会造成系统压力有很大的改变吗？因为我没开空调的时候（15度）压力比开了空调（25度）高了近2MPa，只是流动相高了这么多，然而我冲洗柱子用的纯甲醇基本没什么变化，为什么会这样呢？

第二、我今天做的保留时间是45min（重现性也还不错），不过峰形不太好，峰高不高，不过理论塔板数比较高（毕竟保留时间这么长），而上几次做的怎么会在12.798、15.223、22.365的时间里出峰呢？是不是因为上针的没出来，而在下针出来了？因为我只在40分钟左右就停止采集了

第三、我做样用的波长是276，而药典规定是280，因为280没峰出，我这样改变规定波长做出来的结果可不可靠呢？（我是想反正对照品和样品是在同样的条件下做的，有影响应该会相互抵消吧？？？）

色谱条件：流动相是甲醇：水：磷酸（35：65：0.3），检测波长280nm，理论板不少于3000。

对照品配制：取黄芩苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含15ug的溶液。

供试品制备：精密量取1ml，置50ml容量瓶中，加50%的甲醇至刻度，摇匀，过滤即得。
供和对各进10ul。
流速1.0ml/min
你的柱子的类型是不是错了 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子试试！！！