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紫外吸收检测器的问题

液相色谱(LC)

  • 前两天做色谱,使用了甲醇与水配比的流动相。期间尝试地调了不同的波长,发现基线(整体)会上下浮,平衡还是平衡的。我从300nm到700nm选取了4-5个波长段,发现基线浮动从差距有50-300mAu,按理说300-700的波长已经超过流动相的截止波长了,吸光度是不是应该不变了?这个是杂散光的影响?还是反射率的原因?求指教
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  • zhaohua8011

    第1楼2011/07/15

    不同波长当然会有不同的影响的!

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  • zhetengwang

    第2楼2011/07/15

      不同波长当然吸收会不一样。怎么可能会调波长以后不变呢?

      只要基线平了就行了。

      做液相还太少啊,看来。

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  • bnmfghjk

    第3楼2011/07/15

    但是300到700的波长超过了截止波长,不是不吸收的么?

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  • bnmfghjk

    第4楼2011/07/15

    我的意思是,300到700的波长,已经超过了甲醇跟水的截止吸收限,按理来讲,不是应该全通过的么?那也就不存在吸收不吸收的问题了

    zhetengwang(zhetengwang) 发表:  不同波长当然吸收会不一样。怎么可能会调波长以后不变呢?

      只要基线平了就行了。

      做液相还太少啊,看来。

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  • bnmfghjk

    第5楼2011/07/15

    我试过,在紫外分光光度计下检测,用干净的石英皿装纯水测吸光度,在300到700的范围内,测出的吸光度数值几乎一样的。原因就是300到700的波长不被水吸收,超过截止限的光线,是不是应该不会造成这么大的浮动,这是才是我想问的问题。。

    zhaohua8011(zhaohua8011) 发表:不同波长当然会有不同的影响的!

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  • zhetengwang

    第6楼2011/07/15

    液相紫外检测器原理跟紫外分光光度计是不一样的。

      紫外检测器有参比池和样品池。紫外分光是静态的比色皿。这里是动态的流通池。

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  • bnmfghjk

    第7楼2011/07/15

    我觉得你还是没有给我解释清楚老大,就算紫外检测器有参比池跟样品池,流通池是动态流通池,如果所选的波长是不被吸收的波长,这些因素怎么影响到?我只是很好奇,无意冒犯

    zhetengwang(zhetengwang) 发表:液相紫外检测器原理跟紫外分光光度计是不一样的。

      紫外检测器有参比池和样品池。紫外分光是静态的比色皿。这里是动态的流通池。

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  • zhetengwang

    第8楼2011/07/15

    改变波长,吸光度是一定会变的。

    这里的吸光度跟你那紫外分光光度计不能比。这里的流通池才几ul,当然比你那几毫升的比色皿敏感多了。

    不要说几百个波长,就是改变几个波长就会有变化。

    bnmfghjk(bnmfghjk) 发表:我觉得你还是没有给我解释清楚老大,就算紫外检测器有参比池跟样品池,流通池是动态流通池,如果所选的波长是不被吸收的波长,这些因素怎么影响到?我只是很好奇,无意冒犯

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  • 有水有渝

    第9楼2011/07/16

    应助达人

    背景完全不吸收是不可能的,50-300mAu的变化说的是漂移吗,如果是漂移那可能是色谱柱有污染,并不一定是改变波长引起的;平衡还是平衡的。不知道你的基线噪音有多大,压力稳定性如何?

    bnmfghjk(bnmfghjk) 发表:前两天做色谱,使用了甲醇与水配比的流动相。期间尝试地调了不同的波长,发现基线(整体)会上下浮,平衡还是平衡的。我从300nm到700nm选取了4-5个波长段,发现基线浮动从差距有50-300mAu,按理说300-700的波长已经超过流动相的截止波长了,吸光度是不是应该不变了?这个是杂散光的影响?还是反射率的原因?求指教

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  • bnmfghjk

    第10楼2011/07/16

    恩,50-300mAu的变化是这样:改变波长后,基线往上跳跃300mAu,然后继续走直线,如果继续改变波长,基线又会马上跳动不同的值,不改变波长的情况下,基线走得蛮稳定的。至于基线噪音跟压力稳定性,该怎么提供数据,您能解释下么?

    有水有渝(xky0230699) 发表:背景完全不吸收是不可能的,50-300mAu的变化说的是漂移吗,如果是漂移那可能是色谱柱有污染,并不一定是改变波长引起的;平衡还是平衡的。不知道你的基线噪音有多大,压力稳定性如何?

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