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液相色谱如何分析蛋白质样品

液相色谱(LC)

  • 如题,我想用C8的色谱柱跑液相色谱看一下发酵液中的蛋白质变化,但是发酵液里面较复杂,如何前处理纯化蛋白质,来达到能够上机的要求? 如果用三氯乙酸或有机相使蛋白质变性沉淀,弃去上清,还能否将沉淀溶解?我看到这类方法多用在电泳上面,那液相色谱该用上面方法呢?
    期待高手指点~
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  • 有水有渝

    第1楼2012/03/07

    应助达人

    反相色谱分析多肽或小分子蛋白还有可行性,大分子蛋白比较难,要用到凝凝胶色谱,直接用C8的色谱柱跑我觉得可能性不大,期待其它版友提出更适用的方法。

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  • 该帖子已被版主-2011xiaolong加2积分,加2经验;加分理由:谢谢参与讨论
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  • 耐士科技

    第2楼2012/03/07

    你可以试试Grace的Vydac柱,专门分析多肽和蛋白的

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  • tangtang

    第3楼2012/03/07

    前处理比较难,用紫外-可见分光光度计测可以吗?

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  • uupapaya

    第4楼2012/03/14

    那要是做小分子蛋白和多肽,前处理有什么简单的方法吗?

    有水有渝(xky0230699) 发表:反相色谱分析多肽或小分子蛋白还有可行性,大分子蛋白比较难,要用到凝凝胶色谱,直接用C8的色谱柱跑我觉得可能性不大,期待其它版友提出更适用的方法。

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  • uupapaya

    第5楼2012/03/14

    谢谢,我想先用C8或C4的试试再说

    耐士科技(SH102364) 发表:你可以试试Grace的Vydac柱,专门分析多肽和蛋白的

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  • uupapaya

    第6楼2012/03/14

    谢谢,目前还需要研究下LC的方法的

    tangtang(tangtang) 发表:前处理比较难,用紫外-可见分光光度计测可以吗?

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  • 耐士科技

    第7楼2012/03/16

    键合相是一部分,主要还跟你蛋白的分子量有关,跟硅胶孔径也有很大关系,可以和我探讨,或许我会帮助到你

    uupapaya(uupapaya) 发表:谢谢,我想先用C8或C4的试试再说

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  • zouxizhen

    第8楼2012/04/18

    蛋白质堵柱子了,怎么办?

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  • 有水有渝

    第9楼2012/04/18

    应助达人

    分子量小于3000以下的可能性比较大,用10%三氯乙酸沉淀大分子物质,用0.1%三氟乙酸-乙腈梯度洗脱。

    uupapaya(uupapaya) 发表:那要是做小分子蛋白和多肽,前处理有什么简单的方法吗?

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  • tingmo618

    第10楼2016/07/21

    您好,想请问您说的紫外-分光光度计测量,有哪些相关的好方法、好文章?
    求指导
    谢谢啦!

    tangtang(tangtang) 发表:前处理比较难,用紫外-可见分光光度计测可以吗?

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