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浅谈界面折射对液相色谱紫外检测器信号的影响

支点

2016/08/12

液相色谱（LC）

在我们HPLC谱图中经常看到一些莫名其妙的“峰”，峰形不好、大小没规律、负峰……

上面这张图是我的工作曲线中的三张谱图对比，试剂空白，两个标准品，其中第张图浓度是第二张图浓度的二倍。前面1.6分（也就是红圈所在）位置，空白出现了负峰，两个标准点也没有和被测组分一样形成比例关系也不是等高的信号，这也就是说明这不是物质在检测器上的正常吸收峰。那他们到底是什么原因引起的呢？我的看法就是检测器的光折射信号。
下面就来谈谈我的看法：
百度一下：
“折射”，光从一种透明介质斜射入另一种透明介质时，传播方向一般会发生变化，这种现象叫光的折射。
“界面”，两个或多个不同物相之间的分界面。如气/水界面。
先画一个紫外检测器的草图

（图1结构.JPG）
吸光度信号为A=-Log(I0/I)，经过调零操作后认为I0=I ------这是为了下面理解方便一些。
假设我用纯甲醇做溶剂溶解纯标准品，会在流通池内形成一个“界面”，流动的界面的形状很难完全遵循一定规则，所以发生“折射”应该可以看成是随机的，但折射的效果会有光发散和光汇聚两个结果。

光的折射对于信号的影响到底有多大呢，我来计算一下：
假设出射光收到了界面1%的影响，也就是I1=0.99I0，I2=1.01*I0，分别带入吸光度信号公式：

A1=-Log(I1/I)= -Log(I1/I0)= -Log0.99=0.00436
A2=-Log(I2/I) =-Log(I2/I0)= -Log1.01=-0.00432
数好像不大，但是这是A，我们日常工作中比如在安捷伦的检测器上得到信号单位是mAU，差1000倍，乘一下也就是4.36mAU和-4.32mAU的信号波动。
结束语：很多情况下结果是多个因素决定的，光学检测器除了折射还会有反射，散射等情况发生，我这只是谈了其中很小的一部分，很多东西都是发现了现象然后才去想一写理论来解释它，不能说就是真理，也就是自己的一点想法和大家交流交流。
以上就是我这几天闲来的一点瞎想如果有什么不严谨和不对的地方还望大家不吝赐教。

分
该帖子已被版主-又又1990加20积分，加2经验;加分理由:鼓励原创

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一片枫叶

第1楼2016/08/12

应助达人

很好的理论说明。流通池的污染，流动相的气泡，流动相混合不均都会形成折射反射散射的界面，影响通过流通池的光强，从而使光电信号发生改变产生基线的波动。

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支点

第2楼2016/08/13

应助达人

就是这个意思，色谱信号是一个综合的结果，影响的因素很多，这是简单说说折射，谢谢夸奖。
一片枫叶(v2960432) 发表:很好的理论说明。流通池的污染，流动相的气泡，流动相混合不均都会形成折射反射散射的界面，影响通过流通池的光强，从而使光电信号发生改变产生基线的波动。

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小不董

第3楼2016/09/03

应助达人

不同检测器，得到信号和光学感应也不一样，作者这里是说的紫外检测器吧。
这和灯的稳定性，系统管路流动相的稳定性都有关系，特别是稳定前后。
光路通过比色池，若发生折射后，是否能到光学元件，值得验证。

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我是风儿

第4楼2016/09/04

应助达人

这个一个方面的原因吧，但是没有得到确认

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zyl3367898

第5楼2016/09/04

应助达人

如何解决楼主说的问题呢?还是没办法解决？

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支点

第6楼2016/09/05

应助达人

紫外和二极管测吸光度是一类，荧光检测器测的是发射光是一类，示差测折光是一类。我们主要常用的是第一类，说的也是紫外和二极管的现象。
小不董(doxw0323) 发表:不同检测器，得到信号和光学感应也不一样，作者这里是说的紫外检测器吧。
这和灯的稳定性，系统管路流动相的稳定性都有关系，特别是稳定前后。
光路通过比色池，若发生折射后，是否能到光学元件，值得验证。

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支点

第7楼2016/09/05

应助达人

很多现象都是多方面原因的共同结果，我也只是从这个角度看而已，不论正确与否也只是自己的一些看法而已。
我是风儿(nphfm2009) 发表:这个一个方面的原因吧，但是没有得到确认

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支点

第8楼2016/09/05

应助达人

死体积的不规则峰一般情况下用流动相作为样品基质进样会有很大改善，这一点在很多帖子上都有体现，我也就没有再赘述。
zyl3367898(zyl3367898) 发表: 如何解决楼主说的问题呢?还是没办法解决？

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夏天的雪

第9楼2016/09/06

应助达人

这个峰是否要排除仪器、色谱柱污染或者样品污染的影响呢，如果是界面的折射应该溶解样品的溶剂相同都会出现这样的峰才对啊

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支点

第10楼2016/09/07

应助达人

上面的图都是纯标液，溶剂相同不会是污染，个人理解为界面的不均匀造成的
夏天的雪(bingwang228)发表:这个峰是否要排除仪器、色谱柱污染或者样品污染的影响呢，如果是界面的折射应该溶解样品的溶剂相同都会出现这样的峰才对啊

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