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液相色谱C18柱分离氨基酸

液相色谱（LC）

  • 进行的氨基酸标准品
    柱温37，流速1mL/min
    流动相A 140mmol/L的乙酸铵，pH5.15
    流动相B 乙腈
    流动相C 水
    具体洗脱梯度如下图
    出来的谱图，后面那一团峰分不开，请各位老师帮忙分析一下是什么原因？
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  • sm001108

    第1楼2018/05/28

    具体什么原因不知道，没做过这么多种，抱歉，不能提供解决方案，可以提供个方法。试试药典里阿胶中氨基酸检测方法，这个方法本身可以检测多种氨基酸，衍生物也比较稳定。感觉是到了60分钟还有很多东西在高有机相中被冲出，会不会是衍生化试剂和其他水难洗脱杂质一起被冲出来了？标准品衍生后跑出来也有这样的峰就基本可以确定了。你标准物质在这个条件下能完全洗脱吗？我原来做阿胶的时候过量衍生试剂峰都是最后出。另外，考虑下氨基酸分析仪可以。

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  • dadgoh

    第2楼2018/05/28

    应助达人

    再优化一下64分到74分的梯度程序，使乙腈洗脱浓度变化慢一点。

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  • m3322632

    第3楼2018/05/28

    好的，我试试，谢谢你

    dadgoh(dadgoh) 发表:再优化一下64分到74分的梯度程序，使乙腈洗脱浓度变化慢一点。

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  • m3322632

    第4楼2018/05/28

    好的，那我去查查资料，谢谢你提供方向和思路，非常感谢你

    sm001108(sm001108) 发表:具体什么原因不知道，没做过这么多种，抱歉，不能提供解决方案，可以提供个方法。试试药典里阿胶中氨基酸检测方法，这个方法本身可以检测多种氨基酸，衍生物也比较稳定。感觉是到了60分钟还有很多东西在高有机相中被冲出，会不会是衍生化试剂和其他水难洗脱杂质一起被冲出来了？标准品衍生后跑出来也有这样的峰就基本可以确定了。你标准物质在这个条件下能完全洗脱吗？我原来做阿胶的时候过量衍生试剂峰都是最后出。另外，考虑下氨基酸分析仪可以。

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  • m3322632

    第5楼2018/05/28

    我进的是标准品，就是这个情况，应该是杂质被冲出来了

    sm001108(sm001108) 发表:具体什么原因不知道，没做过这么多种，抱歉，不能提供解决方案，可以提供个方法。试试药典里阿胶中氨基酸检测方法，这个方法本身可以检测多种氨基酸，衍生物也比较稳定。感觉是到了60分钟还有很多东西在高有机相中被冲出，会不会是衍生化试剂和其他水难洗脱杂质一起被冲出来了？标准品衍生后跑出来也有这样的峰就基本可以确定了。你标准物质在这个条件下能完全洗脱吗？我原来做阿胶的时候过量衍生试剂峰都是最后出。另外，考虑下氨基酸分析仪可以。

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  • 夏天的雪

    第6楼2018/05/28

    应助达人

    您做的是多少种氨基酸，峰有没有都出来？可以做一个空白，如果都出来了，那么后面的杂峰可以忽略，或者修改一下梯度方法。您64min之后的梯度变化有些快，这可能是后面杂峰出现的原因

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  • m3322632

    第7楼2018/05/28

    我做了18种氨基酸，后面那里有几个氨基酸混在杂峰里面了

    夏天的雪(bingwang228) 发表:您做的是多少种氨基酸，峰有没有都出来？可以做一个空白，如果都出来了，那么后面的杂峰可以忽略，或者修改一下梯度方法。您64min之后的梯度变化有些快，这可能是后面杂峰出现的原因

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  • 夏天的雪

    第8楼2018/05/28

    应助达人

    那就将44min后延，等峰出的差不多了再改变梯度，或者将梯度变化变缓和，否则梯度的改变就会影响出峰

    m3322632(m3322632) 发表:我做了18种氨基酸，后面那里有几个氨基酸混在杂峰里面了

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  • sm001108

    第9楼2018/05/29

    客气??

    m3322632(m3322632)发表:好的，那我去查查资料，谢谢你提供方向和思路，非常感谢你

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  • m3322632

    第10楼2018/05/30

    嗯嗯，好的，非常感谢。

    夏天的雪(bingwang228) 发表: 那就将44min后延，等峰出的差不多了再改变梯度，或者将梯度变化变缓和，否则梯度的改变就会影响出峰

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