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【“仪”起享奥运】“超级细菌” 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)
小卡
2024/08/09
私聊
食品常规理化分析
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(
MRSA
)
从1961年首次被鉴定出来,流行范围不断扩大,逐渐成为引起医院和社区感染的主要病原菌,可引起严重的感染如菌血症、坏死性肺炎、皮肤和软组织感染、骨髓炎、感染性心内膜炎。相比甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌(MSSA)感染者,MRSA感染者中急性肾功能衰竭、血流动力学不稳定和长期呼吸机依赖的发生率及死亡率更高,住院时间更长且医疗费用更多。因此对定植和感染MRSA的患者进行筛查,并进一步采取接触隔离措施,成为感染防控工作中的重要挑战。
MRSA的定义
临床实验室标准化委员会(
CLSI
)将MRSA定义为对苯唑西林最低抑菌浓度(MIC)≥4μg/mL的金黄色葡萄球菌。根据欧洲抗生素药敏试验委员会(EUCAST)的意见,苯唑西林MIC>2mg/L的金黄色葡萄球菌大多对甲氧西林耐药。所有MRSA分离株都携带mecA基因或相关变异型mecC。这些基因可使细菌对几乎所有β-内酰胺类抗生素耐药,包括头孢菌素类(头孢洛林和头孢吡普第五代头孢菌素类例外)和碳青霉烯类。医院获得性金黄色葡萄球菌感染对抗菌药物的耐药率一直在逐渐增加,成为名副其实的超级细菌。
MRSA定植的影响
金黄色葡萄球菌定植增加了内科或外科侵入性操作后发生葡萄球菌感染的风险。筛查院内患者时应重点关注鼻腔,前鼻孔是MRSA定植最常见的部位,鼻腔MRSA携带者在合并有鼻窦感染或上呼吸道感染的情况下更容易传播;其他重要部位包括咽、腋窝、腹股沟和会阴。MRSA传播的相关因素包括定植、宿主防御受损,以及接触皮肤或污物。MRSA能够在侵入性外源性装置上形成生物膜,例如气管内导管、导尿管及血管内导管。
生物膜有利于MRSA在这些物体表面生存和繁殖,并促进抗菌药物耐药基因在微生物之间传播。
MRSA是引起手术部位感染(SSI)的主要原因。
心胸外科手术、骨科内固定术及免疫功能受损的患者手术部位感染金黄色葡萄球菌后的不良结局风险较高,去定植和术前针对性使用预防性抗菌药物可降低SSI的发生率。一些欧洲国家采用主动监测培养和接触防护措施,联合或不联合细菌去定植,已成功将MRSA的患病率控制在较低水平,最大程度地减少了传播。
甲氧西林耐药机制
mec基因
mec是金黄色葡萄球菌表达甲氧西林耐药性的绝对必要条件。mec结构中的mecA片段编码青霉素结合蛋白2a(PBP2a),该蛋白可使菌株对甲氧西林和其他
半合成
的耐青霉素酶β-内酰胺类耐药。边缘耐药株对苯唑西林耐药的机制可能不同,此类菌株没有mec,或仅极少的耐药亚群有该基因(称为异质性耐药)。
mecR1-mecI
是mecA转录的负性调节因子。这组基因突变会产生耐药性更高的菌株。
β-内酰胺酶基因(blaI、blaRI和blaZ)
是控制
β-内酰胺酶
的表达,由于序列与mecR1-mecI相似,也可下调mecA的转录。但β-内酰胺酶产生耐药性的机制与mec不同,前者会水解β-内酰胺环。这种负性调节未受到严格控制,因此暴露于β-内酰胺类后耐药性的表达相对迅速。较宽松的控制使mec可合成蛋白质,而在更严格的调节控制条件下无法合成。
青霉素结合蛋白2a
PBP是位于细菌细胞膜的肽酶,PBP2a对
β-内酰胺类抗生素
的亲和力较低,可催化细胞壁合成过程中肽聚糖的转肽反应。这是一种诱导型蛋白,可导致菌株对半合成的耐青霉素酶β-内酰胺类药物产生耐药性,包括甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林和所有头孢菌素类。
葡萄球菌盒式染色体mec(SCCmec)
SCCmec是在葡萄球菌中发现的含mec的可移动遗传元件。迄今已发现至少14种。大多数医疗保健相关(主要是医院)MRSA克隆都与SCCmecⅠ型、Ⅱ型和Ⅲ型有关,有多重耐药性。而大多数社区相关MRSA菌株有SCCmecⅣ型或Ⅴ型,以前对其他类抗生素敏感,现在情况已有变化。据报道,已发生数次SCCmec从MRSA转移至适应性良好的MSSA菌株的情况,导致新的MRSA菌株在医疗保健机构中迅速传播。这种转移并不常见,仅限于少数葡萄球菌谱系。2011年,人们从奶牛和人类获得的分离株中发现了一种新的mecA同源物,即mecC(SCCmecⅡ型)。
fem基因
fem和其他辅助基因是耐药性同质性表达所必需的,会影响肽聚糖合成的不同步骤。失活可将同质性耐药菌株转化为异质性耐药菌株。
边缘性耐药
指分离株处于耐药的边缘(称为BORSA)。一些有边缘性耐药的菌株存在mecA,其耐药亚群可能非常小,因此对β-内酰胺类药物更加敏感。在缺乏mecA的菌株中(缺乏PBP2a),其他PBP可能改变或过度表达,导致对β-内酰胺类药物的亲和力降低,或有更多可用于肽聚糖合成的酶。有研究人员提出假说:β-内酰胺酶的过度产生、β-内酰胺类抗生素的缓慢水解,也是mecA阴性菌株边缘性耐药的潜在机制。
高风险人群
有MRSA定植史的患者(此类患者在等待监测检查结果时应先行隔离)
ICU患者
免疫功能低下的患者
长期居住于医疗机构的个体
接受血液透析的患者
曾在过去12个月内住过院的患者
曾在过去3个月内接受过抗生素治疗的患者
入院时有皮肤或软组织感染(SSTI)的患者
相关检测方法
传统的微生物学检测技术包括微量肉汤稀释法、含盐(4%)和苯唑西林(6μg/mL)的琼脂筛选平板,显色琼脂培养法以及头孢西丁纸片扩散法。头孢西丁纸片扩散试验是一种准确的表型检测方法,头孢西丁纸片抑菌圈直径<22mm表明存在mecA基因,该分离株应报告为MRSA。显色琼脂培养法,其中含有金黄色葡萄球菌生长时会改变培养基颜色的底物;通过在琼脂中加入抗生素来达到对MRSA的选择性,能在24-48h内识别出MRSA,但结果会有假阳性,需要用其他方法进行确认。
传统检测 MRSA的培养方法耗时长,阳性率低,常需要1-2天才能得到结果。
如果没有提前采取接触隔离措施,很可能发生院内传播。
那么快速确定MRSA定植并进行接触防护措施就成为感染防控工作的关键环节。
为了满足部分临床科室对MRSA筛查结果时效性较高的需求,本实验室使用赛沛(Cepheid)GeneXpert® MRSA(DNA)检测(实时荧光
PCR
法)。
它采用全自动实时
PCR
方法,定性检测鼻定植风险的患者(包括术前患者)鼻拭子样本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,
用时2小时之内可快速地向患者和临床提供精准的检测结果
,显著地缩短了检测时间,更能快速高效地配合临床部门的诊疗工作。
GeneXpert® MRSA检测原理
检测盒中包含了用于检测金黄色葡萄球菌和MRSA的试剂及样本处理质控(SPC)。样本处理质控是为了监控靶向细菌能被充分的处理并监控在
PCR
反应过程中的抑制剂。探针检查质控(PCC)用于监测试剂的复溶、检测盒中的
PCR
反应管填充、探针的完整性和染料的稳定性。本试剂盒中的引物和探针可检测葡萄球菌A蛋白(spa)、甲氧西林/苯唑西林耐药基因(mecA)和潜入金黄色葡萄球菌染色体attB位点的葡萄球菌染色体盒mec(SCCmec)的基因序列,这3个靶基因均为阳性才能视为存在MRSA。
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