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【金秋计划】蛋白标签的基本知识点扫盲

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2024/09/06

食品常规理化分析

（1）蛋白标签是什么？
一些特定的肽类和蛋白质被广泛用于生产重组蛋白，与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白的表达、检测和纯化。
（2）常见的蛋白标签有哪些？
①His。
His是由组氨酸残基组成的融合标签，可以插在目的蛋白的C端或N端。
His-tag主要用于重组蛋白的分离纯化。
His-tag主要特点：分子量小，对蛋白结构影响较小；可以在变性条件下进行纯化；可用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA相互作用；免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物制备抗体；可以与其它亲和标签一起构建双亲和标签。
②Flag。
Flag-tag为编码8个氨基酸的亲水性多肽。
Flag-tag主要用于提高蛋白表达量。
Flag-tag主要特点：不会与目的蛋白相互作用；不会影响目的蛋白的功能和性质；融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除，从而得到特异的目的蛋白。
③MBP。
MBP标签大小为40kD。
主要用于增加原核表达中融合蛋白的溶解性。然而，由于MBP-tag过大，因此，需要用位点专一的蛋白酶切割标签。
④HA。
HA标签蛋白主要由9个氨基酸组成。主要用于Anti-HA抗体检测和ELISA检测。
⑤Myc。
Myc标签蛋白是一个含11个氨基酸的小标签。
Myc-tag主要应用于WB检测、免疫沉淀和流式细胞计中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。
⑥GST。
GST标签蛋白大小为26KD。主要应用在原核表达中。
GST-tag主要特点：增加外源蛋白的可溶性；可以在大肠杆菌中大量表达，提高蛋白的表达量。
⑦eGFP/eCFP/eYFP/mCherry。
这几类主要是荧光标签，即绿色荧光蛋白/黄绿色荧光蛋白/黄绿色荧光蛋白/红色荧光蛋白。主要用于蛋白的定位和跟踪。
⑧Strep-II。
Strep-II主要由8个氨基酸组成，其分子量很小，不会影响融合蛋白的表位和结构域。主要用于蛋白的分离纯化。
⑨Avi。
Avi-tag标签蛋白是一个由15个氨基酸组成的短肽。可用于蛋白的分离纯化和蛋白质相互作用研究。
⑩SUMO。
SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白。
SUMO可作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以提高融合蛋白的表达量。由于其具有抗蛋白酶水解，促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白的可溶性。
此外，SUMO还可以用于完整地切除标签蛋白，因此，SUMO标签也常用于和其他标签一起应用，作为特异酶切水解位点。
?荧光素酶。
常用的荧光素酶也属于标签蛋白，包括萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

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