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食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验（第一法定性检验）方法验证

承之

2018/10/31

私聊

食品毒素/微生物检测

目的：通过对食品中金黄色葡萄球菌检验方法进行验证，证明我公司采用标准GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》规定的方法对食品中金黄色葡萄球菌的定性和定量的测定满足检测要求。
1 实验室基本情况

表1-1参加验证的人员情况表

姓名	性别	职务	所学专业	从事相关分析工作年限
A	女	微生物主管	食品科学与工程	8年
B	女	微生物组长	食品科学与工程	5年

表1-2使用仪器情况登记表

仪器名称	仪器型号	制造厂商	备注
生化培养箱	SPX-250B-Z	上海博迅实业有限公司医疗设备厂
立式压力蒸汽灭菌器	YXQ-LS-75SⅡ	上海博迅实业有限公司医疗设备厂
净化工作台	SW-CJ-2D	苏州博莱尔净化设备有限公司
生物安全柜	BHC-1300A2	苏州博莱尔净化设备有限公司

表1-3使用试剂登记表

试剂名称	批号	生厂商	备注
7.5%氯化钠肉汤	170321	北京陆桥技术股份有限公司
Baird-Parker平板	3105698	北京陆桥技术股份有限公司	添加亚碲酸钾卵黄增菌液
血平板	180902	北京陆桥技术股份有限公司
脑心浸液（BHI）肉汤	160307	北京陆桥技术股份有限公司
冻干血浆	190423	广东环凯微生物科技有限公司
革兰氏染色液	180108	北京陆桥技术股份有限公司

2 方法验证过程
2.1 菌液制备：
分别挑取一粒金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）和表皮葡萄球菌CMCC（B）26069瓷珠，至BHI液体培养基中，24 h过夜培养。
2.2 样品制备：
2.2.1 试验组：取1 mL2.1中制备的菌液，加入到100 mL无菌盐水中，制成样品原液，作为试验组。
2.2.2 供试品组：不添加任何菌的相同样品。
2.3 培养基/试剂制备：
2.3.1按GB4789.28-2013食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求配制。
2.3.2根据供应商提供的配制说明进行配制。
2.4 实验操作：如下图1（第一法定性检验）

图1—金黄色葡萄球菌定性检验程序

2.5 实验结果判断依据：
Baird-Parker平板上：金黄色葡萄球菌的菌落直径2 mm~3 mm，颜色呈灰色到黑色，有光泽，边缘为淡色，周围绕以不透明圈，在其外层有一清晰带。用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感；表皮葡萄球菌：黑色菌落无光泽，菌落周围无透明圈，其外层无清晰带。
血平板上：金黄色葡萄球菌菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈；表皮葡萄球菌：菌落周围没有透明溶血圈。
镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5μm~1μm。
血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌血浆呈现完全凝固或凝固体积大于原体积的一半，视为血浆凝固酶试验阳性；表皮葡萄球菌血浆不凝固，视为血浆凝固酶试验阴性。
2.6 测试数据：方法验证采用人员比对、阳性对照、阴性对照方式进行方法验证，试验结果如下表1，详细结果见原始记录。

表1-定性检验结果

人员	试验组别	结果/25ml
A	试验组	检出
A	供试品组	未检出
B	试验组	检出
B	供试品组	未检出

实验结果符合标准要求。
2.7是否对方法偏离？
□是 ■否
2.8 结论
根据GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》要求依法检测，结果符合规定。

故我公司对食品中金黄色葡萄球菌的检测符合标准GB 4789.10-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》的要求。

食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验（第一法定性检验） 方法验证

食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验（第一法定性检验）方法验证