如何装填DAC制备柱？

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2018/11/24

私聊

液相色谱（LC）

DAC100轴向动态柱反相填料装柱
一.装柱条件准备
1.装柱场所准备
装柱空间要求为洁净场地,环境温度18--26℃,湿度45--65%
2.装柱工具准备
2.1 装柱气源压力应为0.6-0.8MPA
2.2确保装柱设备清洗干净,待用
2.3准备好装卸DAC100工具
3..装柱的物料准备(反相色谱柱)
色谱级的甲醇(20L)和异丙醇(5L)。
纯净水、无水乙醇、氢氧化钠
4.装柱测试评价液准备
名称:萘或者甲苯
浓度:萘/甲醇=1mg/ml,或者甲苯/甲醇= 1mg/ml
二.动态柱装柱前工作准备
1. 打开气源,将DAC100动态轴向压缩柱液压表打到100bar左右(我们建议
100*250mmFUJI -C18 10um 100A 的柱头压力为100bar)
2. 清洗活塞、下端盖、色谱柱柱管
柱头和柱底的清洗方法如下:
方法一:在确认活塞、端盖无堵塞的情况下采用以下步骤:
A. 用清水清洗活塞、端盖,再用洗洁精洗去除表面污渍。
B. 清洗后用洗洁精水溶液超声清洗20-30分钟去除油脂。
C. 再用清水超声2-3次。
D. 最后用机溶剂(如异丙醇)超声2-3次
方法二:在确认活塞、端盖堵塞的情况下采用以下步骤:
a、用清水清洗活塞、端盖,再用洗洁精洗去除表面污渍。
b、用2mol每升氢氧化钠溶液浸泡至少12小时,浸泡以后用纯水冲洗1小时,然后用超声清洗6次以上,每次大概超声10-15分钟,再用PH计测试PH值,保证最后清洗的清水PH值约为7。
c、用无水乙醇超声2次,每次10-15分钟。
色谱柱柱管内壁的清洗方法如下:
用装有异丙醇的洗瓶,淋洗色谱柱柱管内侧,使柱管内侧无固体颗粒附着。
3. 制作匀浆溶液
A. 称量填料重量,并计算应加异丙醇的重量。计算方法:干填料和异丙醇的重量比是:
干填料/异丙醇=1/2-2.5L ,DAC100动态轴向压缩柱总共所需的FUJI -C18 10um 100A干填料为1.2-1.3kg。
B. 向匀浆瓶中倒入计算好重量的异丙醇,然后将剩余好的填料和补充的填料缓慢加入
匀浆瓶中,边加边搅拌,直到填料全部加到瓶里。
C. 缓慢的搅拌均匀,一般搅拌约20Min。
4. 色谱柱下柱底和活塞的安装:
将清洗好的端盖,活塞,卡箍等按要求在动态柱上安装好,并把下端盖出液口位置用堵头堵死。
5.检查以上工作是否准备妥当,准备好后进行装柱
1. 将油压表的读数打到100bar(此数值因具体填料及情况而定),确认气源开关处于
“OFF”位置,方向开关处于“DOWN”位置,活塞处于最上端位置,将保压阀打开。
2. 将匀好的填料通过漏斗倒入柱筒中
3. 拿开漏斗,打开气源开关,气源开关处于“ON”位置,使活塞向下运动
4. 当活塞头上端液路管有液体流出时,观察有无气泡排出,当气泡排尽后立即将气源开关关闭,用堵头将其堵上,并将下端盖堵头拧开。
5.匀浆液通过色谱柱下端盖接口流出,流入废液桶
6.静置0.5小时后,将色谱柱与检测设备连接。
三.色谱柱性能测试
1.色谱柱的平衡
1.用纯甲醇做流动相,流量100ml/Min,运行10Min
2.用纯甲醇做流动相,流量300ml/Min,运行5Min
3.监测基线,在满量程100mv时,基线水平,说明系统已平衡。
2.色谱柱的测试及重复性
1. 将标样(萘或者甲苯)进样0.2ml后,用纯甲醇,以150ml/min的流速运行,并
点击“采集谱图”,运行20min,待出完峰后点击“手动停止”,将图谱保存,并关闭泵。
2. 了解装柱后主峰萘或者甲苯的理论塔板数和拖尾因子的情况。一般我们认为新填
料的柱效的标准是每米的理论塔板数大于等于20000,且1.2kg的FUJI -C18 10um 100A的填料柱长是250mm。
3. 重复(1)的过程3次,保存图谱。
4. 比较6次图谱的峰的重复性如何,主要是比较主峰萘或者甲苯的理论塔板数、拖
尾因子和保留时间,看看每次的主峰萘或者甲苯的理论塔板数、拖尾因子和保留时间是否一致、重现性如何。
5. 以上措施实施后满足要求就可以重新平衡柱子,进行相关实验。
四.注意事项
1.在正式装柱过程中,装柱时间越快越好,尽量的缩短中间过程的时间,这样才能达到最佳的装住效果。
2.拆卸色谱柱上下柱头过程中应小心仔细,所有配件应妥善保管,防止里面部件的缺失造成不必要的麻烦
3.甲醇、乙醇和异丙醇等都是有毒试剂,装柱过程中应佩戴口罩和手套

分
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