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【实战宝典】反相色谱系统切换成正相色谱有哪些需要注意的问题？

小官人

2021/03/22

液相色谱（LC）

问题描述：高效液相色谱原来使用的是C₁₈色谱柱，现在由于分析需要，需要换正相纯硅胶色谱柱，流动相也要从甲醇换成异丙醇，应该怎样操作？要注意哪些问题？

解答：由于反相和正相色谱系统所使用的流动相差别很大，因此液相色谱系统在从反相向正相色谱转换过程中，需要注意以下问题：

（1）先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净，然后将色谱柱拆下来密封保存。用双通将进样器与检测器连接。

（2）将贮液瓶内装入300mL的二次蒸馏水，将流速渐次提高到2.0mL/min冲洗系统1.5h，注意观察泵压。

（3）将流速渐次降到0.0mL/min，把二次蒸馏水更换为甲醇，将流速渐次提高到2.0mL/min冲洗系统1h。

（4）用同样的方法将甲醇更换为异丙醇、四氢呋喃，各冲系统1h。

（5）最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相冲系统1h，同时将柱塞杆清洗系统内的10%异丙醇更换为流动相，保持50~60滴/分钟的速度清洗柱塞杆。再将双通更换为正相色谱柱，待色谱柱平衡好以后就可分析样品了。

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