多个化合物出峰重叠在一起，可采取什么措施分开？

原因
当多个化合物出峰重叠时，可采用减小载气流速、降低柱温或升温速率、减小进样量、提高气化室温度等措施来提高分离度；当改变柱温和载气流速也达不到分离目的时，就应更换更长的色谱柱，或更换不同固定相的色谱柱，在气相分析中，色谱柱是分离成败的关键。化合物出峰重叠的主要原因有：
①载气流速过快；
②色谱柱温度过高；
③进样量过大；
④气化室温度偏低；
⑤进样时未选择合适的分流比分流；
⑥色谱柱长不够，导致分离度不够；
⑦色谱柱型号选用不对。
解决方案
①载气类型和流速的选择
首先要根据考虑使用的检测器类型选择合适载气。热导池检测器TCD常选用氢或氦气作载气，能提高灵敏度，氢载气还能延长热敏元件钨丝的寿命；氢火焰检测器FID用氮气作载气，也可用氢气；电子捕获检测器ECD常用氮气；火焰光度检测器FPD常用氮气和氢气。
载气成分越轻、纯度越高，越有利于提高分离度。当然，现在的仪器都是固定采用某一种载气，一般不常更换载气种类。
载气流速对柱效率和分析速度都会产生影响。根据范氏方程，载气流速快，能加快分析速度，减少分子扩散，缩短分析时间，但同时可能降低分离度；载气流速慢有利于传质，一般可提高分离度，同时也可能会造成峰展宽而降低分离度。所以当多个化合物峰重叠时，应选择合适的载气流速。根据范氏方程，一定的色谱柱对一定的化合物有一个最佳流速点，这时候柱效最高，分离能力最好，但是人们常用“实用最佳流速”即合适的载气流速。
②柱温的选择
柱温直接影响分离效能和分析速度。柱温低有利于分配，有利于组分分离，但温度过低会造成被测组分在柱上冷凝或传质阻力增加，使色谱峰扩张甚至拖尾；柱温高有利于传质，但会使分配系数变小，不利于分离。对沸点范围宽、组成复杂的混合物应利用色谱柱的程序升温技术，获得最高分离度、最短分析时间的最佳分析结果。
③色谱柱的选择
色谱柱的选择是整个色谱分析条件优化过程中最重要的一环。色谱柱选择是否恰当直接决定了分析结果的准确性、数据的重现性、峰形的美观等。
毛细管色谱柱参数主要包括：固定液极性、柱长、内径、膜厚等四方面。选择色谱柱应根据“相似相溶”原理，分析非极性物质用非极性色谱柱，极性物质用极性色谱柱。根据固定液极性强弱可以分非极性柱（DB-1或等同的其它品牌）、弱极性柱（DB-5等）、中等极性柱（DB-17等）、强极性柱（DB-WAX等）。
　　色谱柱中固定液用量对分离起决定作用。一般来说，载体表面积越大，固定液用量可以越高，允许的进样量也就越多。为了改善液相传质，应使液膜薄一些，固定液液膜薄，柱效能提高，可缩短分析时间；但是膜厚是一个选择空间比较大的参数，膜厚越厚，对分析物的保留会增加，保留时间增大，有助于分离；但是由于传质阻力的增加，柱效又会降低。因此，如果分析保留弱的物质(如一些小分子)，可考虑试试厚液膜的柱子，反之则选择薄液膜的色谱柱。
对填充柱来说，要求载体表面积大，表面孔径分布均匀。固定液涂在载体表面上成为均匀薄膜，液相传质就快，柱效就可提高；载体粒度均匀、细小，也有利于柱效提高；但粒度过小，柱压增大，对操作不利。
柱长对分离的影响也很明显。通常色谱柱越长，理论塔板数越大，分理效果越好，但是保留时间增加也很明显。对于特别难分离的物质，一般应选用长柱。内径对柱容量和柱效亦有较大影响，内径越小，柱容量会下降，但柱效会变高。
④进样时间和进样量
　　手动进样时速度必须快，一般应在1s之内。进样时间过长，会造成峰展宽、前伸或拖尾变形。进样量一般液体0.1-5μL，气体0.1-10mL。进样太多，会使色谱峰展宽，造成前伸、拖尾或重叠而分离不好。
⑤气化室温度的选择
合适的气化室温度既能保证样品组分瞬间完全气化，又不引起样品分解。气化室温度一般比柱温高30-70℃或比样品组分中最高沸点高30-50℃。在保证不发生热分解时，适当提高气化温度对分离及定量均有利。
案例分析

①使用不同升温速率，提高分离度

GC-FPD检测13种农药残留，利用中等极性色谱柱DB-1701分离，升温程序1：初始温度110℃，保持2min，以10℃/min升温至150℃，再以20℃/min升至250℃，保持5min。磷胺2与甲基对硫磷在10.70min同时出峰，完全重叠，见图1。

修改升温程序2：初始温度110℃，保持2min，以15℃/min升温至160℃，再以10℃/min升温至200℃，保持6min，再以15℃/min升至250℃，保持7min。甲基对硫磷在16.746min处出峰，磷胺2在16.966min出峰，甲基对硫磷与磷胺2完全分离，见图2。

②选择固定相不同的色谱柱，提高分离度

GC-FPD检测13种农药残留，利用非极性色谱柱DB-1分离，不论如何调节载气流速，改变升温速率，8.513min对硫磷与毒死蜱完全重合，见图3。

选择弱极性色谱柱DB-5，与DB-1情况相同，调节载气流速与选择不同升温速率，6.608min对硫磷与毒死蜱仍不能分离，见图4，更换为DB-1701色谱柱，选择合适升温程序，毒死蜱16.550 min出峰，对硫磷18.021 min出峰，两种化合物完全分离，见图2。

图1 磷胺2与甲基对硫磷在10.70min同时出峰完全重叠

图4 弱极性色谱柱DB-5中6.608min对硫磷与毒死蜱仍不能分离色谱图