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【金秋计划】药敏试验之E-试验
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2024/09/06
私聊
食品常规理化分析
E-试验(E-test)跟纸片扩散法和稀释法一样,也是药敏试验之一。E-试验是结合了纸片扩散法和琼脂稀释法的原理和特点,是一种抗生素浓度梯度稀释法直接测量MIC的药敏试验的体外药敏试验方法。
一、E-试验原理
E-试验要用到E-试条,它是一条带有抗生素浓度梯度的塑料条。该条带表面涂有抗生素,浓度从条带一端的沿条带逐渐降低,形成连续的对数浓度梯度。将E试条放置于已接种有待测细菌的琼脂培养基上,经孵育后,可见一个以试条为中心的对称抑菌椭圆环,椭圆环边缘与试条交界处的刻度即为MIC值。
二
、E-试
验操作步骤
前面几个步骤跟纸片扩散法一样。
1.菌液制备
采用划线法将大肠杆菌受试菌种和标准菌种接种于营养琼脂平板,35℃培养16-18h,然后挑取单菌落,重悬于3mL无菌生理盐水中,混匀后与标准比浊管比浊。
调整浊度与标准比浊管0.5麦氏相同。
2.倒平板
将MH琼脂培养基溶化后倒平板,注意平皿中培养基厚度均匀,倒3套平板。
90mm×15mm,平板厚度均匀,约4mm厚,大约1/3高度。
3.涂平板
用无菌棉棒蘸取菌液(金黄色葡萄球菌)。将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出,涂布在MH琼脂平板整个平面三次,每次旋转60度,最后沿周边绕两圈,保证涂均匀,平板加盖室温干燥5min。
4.插入E试条
用无菌镊夹取试纸条柄端,将其垂直插入MH培养基,并确保E试条与培养基间无气泡。E试条抗菌药物面(通常标有浓度刻度)朝上,抗生素浓度高的一侧(有标记)靠培养皿。
E试条有垂直插入和平放两种,一般建议垂直插入方式。
5.孵育
将上述平板倒置于37℃恒温培养箱中培养,观察并记录抑菌圈大小。
6.结果分析
孵育后围绕着E试条可形成一个椭圆形的抑菌圈,抑菌圈与试条的横向相交处的读数刻度为 MIC值。
三
、E-试
验与纸片扩散法和稀释法的异同
1.E试验、纸片扩散法和稀释法都是常用的药敏试验,都可以用来选择抗菌药物。
2.E试验和纸片扩散法:操作相似,但E试验更简便,可以直接读取MIC值,相比,纸片扩散法比较繁琐,需要测量抑菌圈的大小。
E试验和稀释法:虽操作上有差异,都可以确定MIC值,但E试条是带有抗生素浓度梯度的塑料条带,在琼脂平板上形成连续的浓度梯度,相比,稀释法比较繁琐,需要连续对倍稀释形成递减的抗生素浓度梯度。
注意事项
1.E试条接触琼脂后,不能移动位置,以免影响抗菌药物在琼脂中的扩散和形成的浓度梯度。
2.E试条需要按照说明书要求进行保存。3.E试条需要正规机构购买。4.平板中E试条的个数要根据平板大小,比如说90cm平板可以插入两条,150cm可以插入6条等。
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