仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
食品检测
>
食品常规理化分析
>
帖子详情
【金秋计划】生物化学这几个实验必须要搞懂
Ins_f4d68f68
2024/09/06
私聊
食品常规理化分析
实验1:天然产物中多糖的提取、分离、纯化与鉴定。
①提取方法:水提醇沉法、超声辅助提取法、微波辅助提取法、酶解提取法和复合提取法。
②分离纯化方法:
脱色处理:树脂吸附法、活性炭吸附脱色法和双氧水脱色法。
脱蛋白处理:Sevage法、三氯醋酸法和蛋白酶解法。
柱层析技术:纤维素柱层析和凝胶柱层析。
③鉴定方法:
含量测定:苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。
分子量测定:高效
液相色谱
法、红外光谱法、凝胶渗透色谱法。
结构分析测定:高效
液相色谱
法、红外光谱法、核磁共振波谱法。
实验2:重组蛋白的表达、分离、纯化和鉴定。
该实验作为一个综合型实验,设计思路如下:
①引物设计与合成;
②重组表达质粒的构建;目的基因的扩增及双酶切、表达载体的双酶切、连接与转化、
PCR
鉴定和测序;
③重组蛋白的诱导表达、条件优化:使用IPTG进行诱导表达,需要优化的条件,包括IPTG浓度、诱导温度和诱导时间。诱导表达完毕后,进行破君处理,SDS-PAGE确定表达条件;
④扩大培养与蛋白分离纯化:进行扩大培养,破碎君体,使用Ni-NTA 纯化柱进行纯化,并使用咪唑进行洗脱;
⑤蛋白鉴定:使用BCA法进行蛋白含量测定,使用Western blot法分析重组蛋白。
实验3:RNA的提取、分离、纯化与鉴定。
①RNA的提取、分离、纯化:主要运用Trizol提取法。
Trizol试剂主要成分:异硫氰酸胍和苯酚。(1)异硫氰酸胍作用:是一类强力的蛋白质变性剂,可抑制RNase的活性避免RNA被降解,还能裂解细胞,使蛋白质变性,释放出核酸;(2)苯酚作用:酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成分层,使RNA与蛋白质和DNA分开。
②RNA的鉴定:
(1)浓度和纯度检测:使用核酸浓度检测仪器测定RNA浓度和纯度。
原理:核酸吸收波长为260 nm,蛋白质为280nm。在波长为260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50 ug/ml,单链RNA浓度为30ug/ml,计算核酸浓度。还可以根据260nm和280nm的OD比值分析核酸纯度:
OD260 /OD280=1.9~2.1,说明纯度良好;
OD260 /OD280<1.9,说明可能有蛋白质;
OD260 /OD280>2.1,说明RNA可能降解。
(2)质量检测:使用琼脂糖凝胶电泳,完整的RNA具有28S、18S和5S的rRNA三条带。
相关话题
1
【金秋计划】琼脂糖凝胶电泳技术详细操作步骤和详解
2
【金秋计划】碱裂解法小规模提取质粒DNA分子
3
【金秋计划】大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒转化
4
【金秋计划】芽孢染色法
5
【金秋计划】“不溶性成分”培养基的配制技巧
近期热榜
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
【中秋佳节】 在一起月更圆!
一个“不符合”难住新领导
第三届微课大赛投票进行中ing
热门活动
第三届微课大赛投票进行中ing
【仪采通】仪器采购更轻松
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【求助】菌种的复苏
2006/12/06
计量称重产品执行标准问题
原创
2024/06/25
【“仪”起享奥运】微生物无菌操作注意事项
分享
2024/08/10
请问茶叶 咖啡碱的测定方法????
已应助
2005/04/07
【金秋计划】+有机汞(甲基汞)的检测方法
分享
2024/09/06
【生活中的仪器分析】矿泉水中氨氮的检测
第六届原创
2013/12/08
浊度的单位NTU和EBC是可以转化吗?还是没有可比性?
已应助
2020/05/28
静态电位溶出法测定茶叶中铅
第六届原创
2011/12/08
二硫化碳的测定曲线怎么做的二乙胺法求大佬指点
讨论
2024/09/14
【金秋计划】样品分离技术都有哪几种
分享
2024/09/13
【金秋计划】分光光度计的吸光度,为何要控制在1以内
分享
2024/09/13
【金秋计划】如何确保你的pH测量始终处于良好状态
分享
2024/09/13
【金秋计划】农残检测前处理方法你选对了吗
分享
2024/09/13
【金秋计划】如何搞定食品留样问题
分享
2024/09/13
【金秋计划】认可与检验检测监督管理司关于实验室一些典型问题的权威回复
分享
2024/09/12
【金秋计划】无菌室的洁净度检测方法与步骤
分享
2024/09/12
【金秋计划】当没有合适的基质时可以用标准加入法来试试看
第十七届原创
2024/09/13
原子吸收火焰法测定土壤中六价铬所用质控样值一直在衰减
求助
2024/09/12
关气瓶是先关总阀还是先关减压阀?
求助
2024/09/14
基线(随机出现)突跃有哪些原因?
求助
2024/09/12
数据和结果
求助
2024/09/11
液质有什么好项目可以做
讨论
2024/09/11
委托加工,条形码到底该用谁的?
求助
2024/09/13
恒温振荡器如何校准?
已应助
2024/09/13
【金秋计划】微生物发酵工艺全面分析
分享
2024/09/06
一座大山把我挡在了这边
原创
2024/09/06
【金秋计划】微生物检测方法
分享
2024/09/06
【金秋计划】BCA定量后WB内参不齐的原因在这里!
分享
2024/09/06
【金秋计划】四种常用色谱柱的活化、清洗、再生和保存
分享
2024/09/06
【金秋计划】“四大神谱”:色谱、光谱、质谱、波谱检测
分享
2024/09/06
【金秋计划】实验室常用微生物接种方法汇总
分享
2024/09/06
【金秋计划】8个引物设计秘诀,PCR成功率直线飙升
分享
2024/09/06
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...